新型菜豆环氧化物水解酶的异源表达及对映归一性催化特性

为挖掘新型环氧化物水解酶（EH）,探讨其对映归一性催化特性,以菜豆（Phaseolus vulgaris）总RNA为模板,采用RT-PCR扩增了一种菜豆EH（PvEH1）的编码基因pveh1,并将其在大肠杆菌BL21（DE3）中进行了表达。一级和三维结构分析表明,PvEH1与绿豆和苜蓿EHs的同源性分别为85.7和81.1%,其催化三联体为Asp¹⁰¹-His²⁹⁹-Asp²⁶⁴,属于α/β水解酶超家族。当PvEH1催化外消旋环氧苯乙烷水解的转化率达99.1%时,产物（R）-苯乙二醇的对映体纯度为33.6% e.e._p。PvEH1对（S）-和（R）-SO的区域选择性系数α_S和β_R分别为91.1和53.3%。PvEH1的挖掘及其对映归一性催化特性的分析不仅增加了此类植物EHs的数目,而且为其归一性催化机制的研究和区域选择性的改造奠定了基础。