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利用PCR技术和DNA体外重组方法,将内皮素A型受体(EndothelintypeAreceptor,ETAR)胞内区cDNA克隆到pUC18载体中进行序列分析。结果表明,DNA序列与预期结果完全相符。然后用低熔点琼脂糖回收插入到pUC18载体中的ETAR胞内区DNA片段,连接到pGEX2T融合蛋白表达载体的凝血酶位点下游,转化大肠杆菌JM103,得到的重组质粒命名为2T/ETAR。JM103(2T/ETAR)经30℃培养、IPTG诱导明显表达出ETAR胞内区融合蛋白,表达产物主要以包涵体形式存在。包涵体经变性和复性后,用亲和层析一步纯化法获得了较纯的ETAR胞内区融合蛋白,为进一步研究ETAR胞内区的功能打下了良好的基础 相似文献
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