鸡胚原始生殖细胞的分离和鸡鸭嵌和体的制备

探索了鸡胚12～17期血液中的原始生殖细胞(PGCs)迁移数量变化规律,将其在液氮中冷冻保存.并以Ficoll密度梯度离心、MiniMACS磁气分离、滤膜三种方法对PGCs进行分离,结果发现12～17期血液中均有PGCs存在,13期达到高峰约47.1±10.5个/μl,在血液中比例为0.0126%.冷冻保存3个月后解冻成活率达80%以上.三种分离方法所得的分离效果分别为95.7%、39.2%、63.0%,纯度为27.5%、8.4%、3.1%.将分离的原始生殖细胞以微注射法转移至14～15期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌和体,获得8只雏鸭(8/110).以鸡W染色体探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测到鸡原始生殖细胞,嵌和率达84.2%(16/19).表明鸡原始生殖细胞能够迁移定居到鸭胚性腺中,并有可能增殖分化成有功能的配子.     

鸡鸭异种间嵌合体的制备

本研究采集孵化14期鸡胚血液中的原始生殖细胞,在液氮中冷冻保存三个月后,解冻成活率达80％以上。以Ficoll密度梯度离心将其从血液中分离纯化,分离获得纯度为27.5%,平均每枚胚胎可获得近50个PGCs。将分离的PGCs 100-200个以微注射法转移至15期早期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌合体,孵出8（6♂,2♀）只雏鸭,总孵化率为7.3%（8／110）。以鸡W染色体特异性DNA探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测鸡PGCs。在被检测的21个鸭胚的性腺中,16个有不同程度的阳性信号,嵌合率达76.2%(16/21)。实验结果表明鸡原始生殖细胞能够迁移并定居到鸭胚性腺中,并有可能在鸭性腺中增殖分化成有功能的配子。