金钱鱼毒腺cDNA表达文库的构建及EST序列分析

以金钱鱼 (Scatophagusargus)毒腺为出发材料 ,构建以真核表达载体pcDNA3 0为基础的金钱鱼毒腺cDNA表达文库 .应用SMARTTM cDNALibraryConstruction技术和生物信息学分析等方法 ,通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得了 2 0 1个金钱鱼新表达序列标签 (ESTs) ,其中已确定全长cDNA的克隆有 2 7个 ,包括多个核糖体大小亚基蛋白 (ribosomalprotein)、细胞凋亡相关蛋白 (programmedcelldeath 10 ) ,G蛋白信号调控子 (Gproteinsignalingregulator)、胸腺素(thymosinbeta 4 )、延伸因子 (translationelongationfactor 1 alpha)和泛素 (ubiquitin)等 .金钱鱼毒腺cDNA表达文库的成功构建 ,为研究金钱鱼毒腺的活性组分及其作用机制奠定了基础 ,也是分离新基因不可多得的重要资源     

平颏海蛇碱性磷脂酶A_2的融合表达、纯化及活性特征

 将编码平颏海蛇碱性磷脂酶A2 的基因 (PLA2 9)克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pPETTRX的trxA基因的 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 .2 5℃下经IPTG诱导 ,该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达 ,表达量达 2 0 %以上 .利用金属螯合亲和层析和凝胶过滤层析两步纯化 ,得到纯度 85%的融合蛋白 .经肠激酶切割和离子交换柱层析进一步纯化后 ,得到浓度 95%以上的成熟PLA2 9.对重组PLA2 9进行了Western印迹检测 .重组PLA2 9具有与天然PLA2 相近的酶活性 ;并具有对HL60等几种肿瘤细胞的细胞毒作用 ,这在海蛇PLA2 中是首次报道 .平颏海蛇碱性PLA2 融合表达及快速纯化系统的建立 ,为深入开展其结构与功能关系研究奠定了基础     

多个抗虫基因转化水稻两用系培矮—64S

应用基因枪法对水稻两用系培矮－64S进行了转化。质粒载体pKC-3串联了三个抗虫基因,将其转化成熟胚诱导形成的愈伤组织,共获得33株转基因植株。分别对R0代植株不同的基因进行PCR及Southern blot分析,并对R1代植株进行了PCR分析。结果表明,三个抗虫基因均已整合到水稻基因组并获得稳定遗传。     

利用微波炉快速制备水稻基因组DNA PCR模板

建立了利用微波炉法快速制备水稻基因组DNA PCR模板的程序,成功地从水稻基因组扩增到了相应基因。     

绿色荧光蛋白基因在水稻细胞中的高效表达

绿色荧光蛋白基因在水稻细胞中的高效表达＠许新萍＠黄粤＠卫剑文＠李宝健￥中山大学生物工程研究中心绿色荧光蛋白,水稻,瞬间表达,β－葡糖苷酸酶绿色荧光蛋白基因在水稻细胞中的高效表达许新萍黄粤卫剑文李宝健（中山大学生物工程研究中心广州５１０２７５）关键词绿色荧...     

基因枪法转化水稻E32后代非目标农艺性状变异的研究

采用基因枪法将4个抗真菌性病害基因(RAC22、RCH10、β-1,3-Glu和B-Rip)导入超级稻(Oryza sativa L.)恢复系E32中,经选择获得10个T4代转基因株系。分蘖盛期纹枯病抗性鉴定表明外源基因已在转基因株系中得到表达并获得抗性,这些转基因株系除了产生抗病性等目标性状的变异外,还发生生育期、植株形态、谷粒外观及产量性状等非目标农艺性状变异。对这些非目标性状进行遗传增益和稳定性分析表明,不同转化株系间或性状间的遗传增益均存在较大差异,其中遗传增益最高的性状是单株穗数、着粒密度和单株产量;各性状中以株高、穗长和谷粒外观性状的变异程度最低,单株穗数和千粒重的变异系数最大。通过选择可获得产量与品质性状均有提高的转基因水稻。     

早籼稻培矮64S愈伤组织形态及植株再生

研究了早籼稻品种培矮64S种子胚愈伤组织诱导的再生的条件。调节培养基中的2,4－D,KT及NAA等激素浓度,胚性愈伤组织诱导频率可达到48．5％,愈伤组织学再生频率接近60％。结果表明,合适的激素浓度可显著提高籼稻组织培养的效率。     

基因枪法转化籼稻胚性愈伤组织获得可育的转基因植株

以籼稻胚性愈伤组织作为基因枪法转化的靶材料,建立了可重复的、高效的籼稻转化系统。从籼稻成熟胚诱导生长３￣４周的愈伤组织,经过２￣６周继代培养后,可以形成足够量的颗粒状胚性愈伤组织。用含有ｂａｒ基因和Ｂ．ｔ．δ－内毒素基因的质粒ｐＦＷＺ１６轰击转化胚性愈伤组织,在含２￣４ｍｇ／Ｌ Ｂａｓｔａ的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养,并通过干燥处理增加再生频率和出苗数。从接种到获得转化小植株只需要４     

日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的构建和初步分析

以海洋生物日本鬼鲉毒腺为材料,应用SMART^TM cDNA Library Construction技术,构建以真核表达载体pcDNA3.0为基础的日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库.通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析,获得94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签（ESTs）,其中已确定全长cDNA的克隆有35个,包括溶细胞素基因、类短链神经毒素蛋白、C型凝集素、巨噬细胞迁移抑制因子、致病相关基因等,这些基因在日本鬼鲉中绝大多数为首次发现.日本鬼鲉毒腺cDNA表达文库的成功构建,为深入研究日本鬼鲉毒腺的组分及其分子作用机理奠定了基础.