一种纯化双链DNA测序模板的有效方法

以变性质粒ＤＮＡ为模板的核苷酸序列分析（又称双链ＤＮＡ测序）的结果会受到诸多因素的影响。然而,模板的制备及其纯度显得尤为重要。本试验对以三种方法纯化的质粒为模板的测序结果作了比较,结果显示．能为普通实验室所采纳的二氧化硅吸附法操作上简单、重复性好,其结果可与Ｍ１３顺序分析系统相媲美。     

马立克氏病病毒强毒GA株基因组BamH Ⅰ-L片段的序列分析

马立克氏病病毒（Ｍａｒｅｋ’ｓｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ,ＭＤＶ）是一种能诱导鸡淋巴组织增生或淋巴肿瘤的细胞结合性疱疹病毒,由此而引起的马立克氏病（Ｍａｒｅｋ’ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＭＤ）也是迄今为止唯一可以利用疫苗进行有效控制的肿瘤性疾病。鉴于此,作为研...     

多媒体技术在电镜教学中的应用

电镜技术与细胞超微结构属于形态学课程,随着时代的进步,科技的发展,多媒体技术应用于电镜教学中,它可以弥补传统教学模式的不足,改变传统形态学教学抽象、枯燥、满堂灌的教学模式,激发学生的学习兴趣,提高教学效果。     

中等职业学校计算机教育改革探讨

为适应时代需要和社会的发展,针对如何深化与改革中等职业学校计算机教学进行了一些探讨。我们要转变教育观念,提出新的教学目标,设置更合理的课程体系,提高教师专业水平,对中等职业学校计算机教育进行改革。     

HIV-1 Tat蛋白对人类疱疹病毒8型复制的影响

用HindⅢ将HIV-1Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,BamHI、NotⅠ将绿色荧光蛋白(GFP)编码基因从表达质粒pcDNA3．1 ／GFP中切出,分别插入到质粒LZRSpBMN-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS—Tat101和LZRS—GFP。采用磷酸钙转染法将两重组质粒转染到含反转录病毒env,gal和pol编码基因的包装细胞Phoenix(φNX)中,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系。分别收集稳定细胞系分泌的病毒上清,并感染体外培养的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BC2BL-1细胞。收集LZRS—GFP重组病毒感染的BCBL-1细胞进行流式细胞计数,检测GFP表达水平。收集LZRS—Tat101重组病毒感染的BCBL-1细胞,提取蛋白作Western blot,检测Tat蛋白表达状况;取细胞总RNA作Northem blot和定量PCR,检查HHV-8次要衣壳蛋白ORF26 mRNA转录水平。重组LZRS—Tat101病毒进一步感染HL3T1细胞(HeLa细胞包含HIV-1-LTR／CAT报告基因),收集感染细胞提取蛋白,检测CAT活性,评价Tat生物学功能。PCR扩增HHV-8复制和转录激活蛋白Rta启动子区上游序列,并克隆至pGL-3载体中,构建Rta启动子 虫荧光素酶(Luciferase)报告基因重组质粒。此重组质粒进一步电转染预先感染了LZRS—Tat101病毒的BC-3细胞,TPA刺激后收集细胞,检测Luciferase活性。结果显示：①重组反转录病毒感染BCBL-1细胞,一次感染效率达56％;②重组LZRS—Tat101毒能够在其感染的BCBL-1细胞中表达Tat蛋白,且表达蛋白具有转录激活功能;③Tat蛋白不能有效上调HHV-8Rta启动子活性;④细胞内HIV-1Tat蛋白诱导HHV-8可溶性周期复制的能力较弱。提示,单纯HIV-1Tat蛋白并不能激活潜伏感染的HHV-8。     

多种教学法在电镜技术实验教学中的应用

根据不同专业、不同学时数、不同层次进行电镜技术实验课教学,达到最佳教学效果,是实验教学需要改进和探索的。     

红色毛癣菌临床分离株的菌落形态和镜下结构特征再分析

目的探讨红色毛癣菌的菌落形态和镜下结构特征以及与感染部位的相关性。方法采用传统培养方法对192株红色毛癣菌进行表型分型,选取其中39株在28℃、30℃、35℃3种温度孵育6d、10d、14d时观察菌落形态和生长速度。结果192株红色毛癣菌共分离出3种表型：绒毛型、沟纹型、粉末型（或颗粒型）。在相同培养基上,28℃、30℃时菌落生长速度无显著差异（P〈0.05）,均快于35℃（P〈0.05）。在相同温度时,菌落在SDA上的生长速度快于PDA培养基。在28℃、30℃时菌落形态比较稳定,在35℃时变异较大。菌落在PDA培养基上产孢丰富,镜下显示有较多的大、小分生孢子,而在SDA培养基上只有少量的小分生孢子,几乎见不到大分生孢子。各种浅部感染均以绒毛型为主,绒毛型在手足癣中占比例最高,沟纹型在体股癣中所占比例较高,粉末型在甲癣中占的比例较高。结论红色毛癣菌的菌落形态与培养基和培养温度有关,其表型和镜下结构与感染部位均有一定的相关性。     

CD/5-FC对KSHV肿瘤转化基因K12诱导NIH3T3转化细胞的杀伤作用

采用分子克隆技术构建含卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma—associated herpesvirus,KSHV)转化基因K12和含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因重组逆转录病毒表达质粒,分别命名为LZRS-K12和pLXSN—Fcy∷Fur。将LZRS-K12质粒转染NIH3T3细胞系,诱导细胞转化获得具有肿瘤细胞生物学特性的N／K12细胞,进一步将pLXSN—Fcy∷Fur质粒转染N／K12细胞,获得含CD基因的N／K12／FF细胞。加入5-氟胞嘧啶(5-FC)后,采用MTT法、流式细胞仪和免疫组化(IHC)等方法,分别检测细胞存活率、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达。结果显示,N／K12／FF细胞在使用5-FC后存活率明显下降。流式细胞仪检测结果显示,5-FC作用后的N／K12／FF细胞的凋亡率与作用前相比增加了4．6％。与此同时,经5-FC作用后的N／K12和N／K12／FF细胞的生长周期发生了明显变化,均表现为G0-G1期细胞比率降低,S和G2-M期细胞比率增高。5-FC使得N／K12细胞的增殖主要阻滞在G2-M期,而N／K12／FF细胞的增殖主要阻滞在S期。IHC检测结果表明,N／K12细胞在5-FC使用前后Fas和Fas-L表达改变均不明显;而N／K12／FF细胞在5-FC使用后的Fas和Fas-L表达水平均明显高于5-FC使用前的水平。提示,CD／5-FC对KSHV肿瘤转化基因K12诱导NIH3T3转化细胞具有杀伤作用;凋亡有可能介导了部分杀伤过程;Fas和Fas-L有可能部分参与凋亡的诱导。     

免疫佐剂CpG DNA的研究进展

CpG DNA存在广泛的免疫效应,其免疫效应有赖于DNA中的模体,同时具有种属特异性和细胞特异性。CpG DNA的作用机制目前还不很清楚,但此方面的研究导致了许多新的发现,目前CpG DNA已有了多方面的应用。