GST-Ets-1融合蛋白的表达与纯化

[目的]旨在原核表达Ets-1基因,纯化获得GST-Ets-1融合蛋白。[方法]以SD大鼠脑垂体cDNA为模板,利用PCR扩增含有Bam HI和Not I酶切位点的Ets-1基因;然后将其克隆到pGEX-4T-1原核表达载体中,将正确的重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3);用IPTG诱导表达,再利用Magne GST particles亲和纯化GST-Ets-1融合蛋白;最后通过Western blot鉴定此融合蛋白。[结果]成功构建pGEX-4T-1-Ets-1原核表达载体;30℃条件下,0.2 mmol/L的IPTG能诱导出大量的可溶性GST-Ets-1蛋白;经Magne GST particles纯化的GST-Ets-1蛋白可被识别ETS-1的抗体特异识别。[结论]纯化的GST-Ets-1蛋白可用于后续的生物学研究。     

深海低温脂肪酶基因工程菌LIP001发酵条件的优化

对从深海沉积物宏基因组文库中获得的产低温脂肪酶基因工程菌LIP001进行了发酵条件优化。通过单因素试验对LIP001产脂肪酶的主要影响条件进行了探讨,确定了培养条件为30℃、pH7.0、接种量5%、装液量50ml。在单因素的基础上通过正交试验优化了影响重组菌LIP001产酶主要因素:橄榄油、酵母粉、磷酸盐、MgSO₄,确定了培养基为橄榄油1%、酵母粉0.5%、蛋白胨1%、硫酸铵0.5%、磷酸盐0.5%、MgSO₄为0.2%、氯霉素12.5μg/ml,优化后的脂肪酶活为1980U/ml,比优化前提高了54.7%,为大规模发酵奠定了基础。采用5升发酵罐方法试验,酶活达到2420U/ml。