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将解除了葡萄糖阻遏的纤维素酶高产菌株瑞氏木霉TrichodermareeseiRutC30经EMS诱变后,在酪蛋白平板上筛选出部分蛋白酶缺陷突变菌株T.reeseiRutC30M3。RutC30M3的胞外蛋白酶活力比亲本株降低约74%,但生长特性、产纤维素酶活力等性状与亲本株相同。用携带潮霉素磷酸转移酶基因(hph)的表达质粒pAN7-1分别转化瑞氏木霉RutC30和RutC30M3原生质体,转化结果显示RutC30M3(pAN7-1)对潮霉素的抗性比RutC30(pAN7-1)提高约20%,而Northernblot分析结果显示在两菌株中潮霉素基因转录水平相似,由此证明宿主菌蛋白酶缺陷对保护重组蛋白免于降解有明显作用。蛋白酶缺陷菌株RutC30M3适于作为瑞氏木霉外源基因表达系统中的受体菌株用于大量生产同源与异源蛋白。 相似文献
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中国北方人群谷胱甘肽转硫酶P1基因多态性及其与胃癌遗传易感性的关系 总被引:2,自引:0,他引:2
为了分析中国北方人群谷胱甘肽转硫酶P1基因(glutathione-S-transferase P1, GSTP1)多态性分布, 同时探讨GSTP1基因多态性及其与幽门螺杆菌(H. pylori)既往感染联合作用对胃癌发病风险的影响, 采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测1,612例外周血DNA GSTP1的多态性; 采用ELISA方法检测血清H. pylori IgG。结果显示, (1) 中国北方人群GSTP1基因Val等位基因分布频率为22%, 胃癌高、低发区GSTP1 Val等位基因分布频率有显著性差异(0.23/0.20); (2) 以Ile/Ile基因型为参照组与其他两种基因型比较进行胃癌的风险分析, 结果显示携带Val/Val基因型的个体患胃癌的危险性最大, 其OR为5.588 (3.256 ~ 9.591); 携带Val等位基因的个体患胃癌危险性是非携带Val等位基因个体的1.587倍; (3) 以H. pylori IgG(-)并携带GSTP1基因纯合野生型(Ile/ Ile)的个体为参照, H. pylori IgG(+)并携带纯合多态基因型(Val/Val)的个体患胃癌的风险最高, OR为17.571(6.207 ~ 49.742)。说明GSTP1 Val等位基因的分布存在人群及地区差异。携带GSTP1 Val等位基因的个体胃癌发病风险增高。GSTP1 Val等位基因纯合型与H. pylori感染对于胃癌的发生具有交互作用。 相似文献
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丝状真菌基因表达系统研究的现状及展望 总被引:4,自引:0,他引:4
利用大肠杆菌和酵母作为宿主菌生产外源蛋白有不少已发展到工业规模,但其存在的缺陷表明它们并不总是生产外源蛋白的理想宿主。大肠杆菌大量合成的外源蛋白大多以包涵体形式存在于细胞内,且不能对真核蛋白进行糖基化等翻译后加工,所以大肠杆菌作为表达宿主很难直接得到有活性的真核蛋白;酵母合成的蛋白虽然可以外泌,但其产量普遍低,并且酵母对外源蛋白的修饰模式与高等真核生物的差别较大。丝状真菌作为生产外源蛋白的宿主可弥补细菌和酵母的不足。首先,丝状真菌具有很强的外泌蛋白能力。其次,丝状真菌能对合成的真核蛋白较正确地进… 相似文献
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丝状真菌表达分泌系统中受体菌的构建 总被引:8,自引:0,他引:8
黑曲霉糖化酶高产菌株T21经紫外诱变后, 通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定筛选出胞外酸性蛋白酶活力仅为原株076%的菌株A.nigerT21-201,其生长特性和产糖化酶活力与原株基本一致。利用原生质体PEG法将含有报告基因vhb的表达分泌质粒Pgt10-vhb通过与选择标记质粒的共转化导入此蛋白酶部分缺陷株及其原株T21,检测在蛋白酶缺陷株Aspergillus niger T21-201 和原株T21中VHb的分泌表达,结果表明在A.nigerT21-201中VHb表达水平显著高于原株,但Northern blot却显示在两菌株中vnb基因的转录水平近似,由此证明酸性蛋白酶缺陷对保护外源蛋白产生了显著效果。
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丝状真菌外源基因表达系统研究的现状及展望 总被引:1,自引:0,他引:1
利用大肠杆菌和酵母作为宿主菌生产外源蛋白有不少已发展到工业规模,但其存在的缺陷表明它们并不总是生产外源蛋白的理想宿主. 相似文献
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