人肿瘤坏死因子基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达

以质粒ｐＩＪ４８６为载体,将来源于质粒ｐＨＴ１的肿瘤坏死坏因子（ＴＮＦ－ａ）ｃＤＮＡ克隆至变铅青链霉菌,以新霉素（３０μｇ／ｍｌ）为选择标记,获得了数百转化子,实验表明Ｎｏ．７转化子ｓ．ｌｉｖｉｄａｎｓ ＴＫ５４－ＨＴ所含重组质粒ｐＩＪＴ７已克隆有ＴＮＦｃＤＮＡ。Ｌ９２９细胞毒实验结果表明该转化子ＴＮＦ表达量可达１０＾８活性单位／升以上,中和实验确证其表达产物为人ＴＮＦ－ａ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明克     

人α型肿瘤坏死因子基因在昆虫细胞中的表达

将人肿瘤坏死因子α(Tumoor Necrosis Factor α,TNF-α)cDNA片段克隆到转移载体pat610上．然后与苜蓿尺蠖核型多角体病毒(Autogropha californica Nuclear PolyhedrinVirus,AcNPV)DNA共转染草地贪夜蛾细胞(Sptodoplet frugiperda)Sf21,获得含hTNF-a基因的重组病毒。以L929细胞毒方法测得重组病毒感染Sf21细胞72小时时的表达量最高,为1．0×10^-4u／lO 6细胞;同时,培养液中小牛血清浓度对hTNF－α表达量有较大影响,当浓度为6%时hTNF—α表达量最高．感染72小时表达量可达5．2×10⁴u／1O⁶细胞,ELISA实验结果证明其产物确为hTNF—α。