流感病毒神经氨酸酶抑制剂的筛选

以神经氨酸酶为药物靶点筛选神经氨酸酶抑制剂, 是研究和开发抗流感病毒药物的重要途径. 应用虚拟药物筛选方法, 从化合物数据库中选出部分待测化合物, 然后应用已建立的 神经氨酸酶抑制剂的高通量筛选模型, 检测了这些化合物的抑制活性, 从中发现了3个活性较高、结构新颖的化合物, 其IC50在0.1~3 μmol/L之间, 这些活性化合物的结构特点, 对于新型神经氨酸酶抑制剂的设计与开发, 将提供重要的信息指导. 流感病毒神经氨酸酶抑制剂的筛选结果表明, 虚拟筛选技术与高通量筛选技术的合理结合, 将有利于促进药物筛选与药物发现.     

重组人CLK1的真核表达及鉴定

目的:合成真核细胞CLK1(Cdc2-like kinase 1)编码基因,构建CLK1/pEGFP-N2真核表达载体并在真核细胞HEK293A中过表达,为CLK1的生物学功能研究奠定基础。方法:从人脐静脉血管内皮细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术用已知引物合成cDNA,将CLK1基因扩增后插入真核细胞表达载体pEGFP-N2,将重组质粒热转化至大肠杆菌感受态Trans 10细胞中获得重组菌株,提取质粒进行酶切鉴定及插入基因测序;将构建的重组质粒转染HEK293A细胞,用Western印迹及免疫荧光检测CLK1的表达水平,同时对其下游的磷酸化SF2/ASF蛋白进行检测。结果:构建了CLK1/pEGFP-N2真核表达载体,将其转染HEK293A细胞后24 h,CLK1蛋白表达水平最高;同时,CLK1过表达后使得下游的SF2/ASF蛋白磷酸化水平升高。结论:构建了人CLK1基因的真核细胞表达载体CLK1/pEGFP-N2,并在HEK293A细胞中过表达,其生物活性也得到了验证。本研究为外源性CLK1基因在真核细胞中过表达提供了一种途径,为CLK1的生物学功能研究奠定了基础,也可为真核细胞其他蛋白表达体系的构建提供借鉴。     

新型乙酰胆碱酯酶抑制剂的三维定量构效关系研究

通过应用乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选模型, 检测了一系列苯戊烯酮衍生物的抑制活性, 然后应用比较分子场分析方法, 建立了乙酰胆碱酯酶抑制剂结构与活性之间的三维定量构效关系模型, 为设计高活性的乙酰胆碱酯酶抑制剂提供线索. 模型R²_CV = 0.629, 最佳主成分数为6, 传统相关系数为R²＝0.972, F＝72.41, 标准误差SE＝0.331, 所得模型不仅可以解释化合物的构效关系, 而且对高活性化合物有很好的预测能力. 通过比较立体场和静电场的系数等势图, 分析了结构与活性的关系, 得到的结果可以指导新化合物的设计与合成.     

天然提取物数据库的计算机管理方法探讨

为适应高通量药物筛选,建立天然提取物数据库,对于活性化合物的发现及其进一步研究具有重要意义。我们根据提取物数据库的要求以及现有数据库软件的特点,探索出合理使用这些软件的方法,使软件可以优势互补,以更好地进行提取物数据库的管理。