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介绍了碱基组成、碱基修饰或替代、DNA骨架的修饰、DNA配体的结合及反应体系中的盐离子和pH值等因素对三链DNA稳定性的影响。对三链DNA稳定性研究中应注意的几个问题也作了讨论。 相似文献
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为评价SV4 0载体 COS7稳定表达系统的可能应用价值 ,将含人组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)编码区的SV4 0载体pctPA转染COS7细胞 ,并以G4 18选择培养 2 8d ,得到稳定的抗性细胞库 .Southern印迹和溶圈法分别分析该细胞库在随后的细胞传代中细胞内附加体拷贝数及t PA表达水平的变化 .在经选择培养 2 8d的COS7细胞库中 ,质粒pctPA以染色体外附加体的形式存在 (30 0拷贝 细胞 ) ,t PA的表达水平为 1 1μg d(10 6细胞 ) .在随后 3个月的动态观察中 ,随着细胞传代 ,该COS7细胞库tPA的表达水平虽逐渐递减 ,但在第 1个月内可保持在 1μg d(10 6细胞 )以上 .基于SV4 0载体 COS7稳定表达系统无需筛选克隆 ,在稳定的抗性细胞库形成后的 1个月内可能保持目的基因的高水平表达 ,因而较适合于需同时制备多种重组蛋白的实验 . 相似文献
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三链DNA的形成抑制DNA结合蛋白与启动子的结合 总被引:3,自引:1,他引:3
电泳迁移分析方法及DNaseⅠ足迹实验表明21nt脱氧寡核苷酸G3TG2T GT2G5TG2TGT(CP1)与乙肝病毒(HBV)核心启动子(Cp)片段之间三链DNA的形成有较高的特异性及稳定性.凝胶滞留实验显示, 在大鼠肝细胞核提取物体外转录系统中, CP1可特异地抑制DNA结合蛋白与Cp片段的结合, 而不能与Cp结合形成三链DNA的脱氧寡核苷酸CP3(TGTG2TG5T2GTG2TG3)对蛋白与Cp的结合并无抑制作用.这些结果表明, 三链DNA的形成有可能抑制HBV DNA的转录. 相似文献
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反基因策略及其靶序列的选择 总被引:5,自引:0,他引:5
反基因策略及其靶序列的选择刘定燮,王昌才,黄建生(第一军医大学分子生物学研究所,广州510515)关键词三链DNA,反基因策略合成的脱氧寡核苷酸在一定条件下可缠绕于DNA双螺旋的大沟内并以氢键与其相互作用形成三链DNA结构。一般把这类能形成三链结构的... 相似文献
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自Dervan等1987年首先证实三链DNA的形成可介导对靶DNA的特异切割以来,有关三链DNA的研究进展和奶快。本综述了近几年分子间三链DNA在基因表达调控、染色体作图、基因分离及定点诱变等方面的应用,并对三链DNA应用中存在的几个问题及相应的解决方法作了简单介绍。 相似文献
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以克隆乙型肝炎病毒pC/C及C基因为例,报道了在DNA重组中,当目的基因与载体末端不匹配时可采取的一新方法.用内切酶切取的基因片段为平端时,可在含dATP的反应体系中,用Taq酶的末端转移酶活性在其3′末端加上单个碱基(dA)的突出尾;基因片段为3′凹端时,可在含4种dNTP的体系中,利用Taq酶的聚合酶活性先将其末端补平,再经末端转移酶活性在其3′末端加dA尾;末端经此修饰的基因片段可亚克隆至T载体中,再克隆于其他表达载体中. 相似文献
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DNA的G—四联体螺旋结构 总被引:1,自引:0,他引:1
DNA的G┐四联体螺旋结构刘定燮王昌才(第一军医大学分子生物学研究所,广州510515)关键词DNAG-四联体螺旋端粒是由独特的DNA序列及相关蛋白质组成的线性真核染色体末端结构,它参与稳定染色体末端及其精确复制等过程。端粒DNA一般由富含G的简单重... 相似文献
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