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选取已稳定转染HBV X基因的QSG7701细胞(pCMVX/QSG7701),并以稳定转染空质粒pRc/CMV2的QSG7701细胞(pRcCMV2/QSG7701)及未转染的QSG7701细胞为对照,用免疫荧光方法检测pCMV X/QSG7701细胞中HBX蛋白的分布;用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测细胞中c-Myc表达:用光镜及电镜观察细胞形态学变化,进一步研究乙肝病毒(HBV) X基因对永生化非瘤性人肝细胞QSG7701的转化作用.研究发现,乙肝病毒X(HBX)蛋白主要分布在细胞膜及细胞浆;c-Myc mRNA及c-Myc蛋白在3种细胞中均有表达,但转染了X基因的细胞中c-Myc的表达水平较其他两组明显升高(p<0.Ol);光镜和电镜下观察发现pCMV X/QSG细胞的胞核较大,核膜增厚,核仁肥大且增多,核/浆比例失调.可见少量多核巨细胞,pRc-CMV2/QSG7701细胞与QSG7701细胞核浆比正常,染色质分布均匀,胞核大小及形态正常.结果表明.HBVX基因成功转染了QSG7701细胞,HBV X蛋白主要分布于转染细胞的细胞膜和细胞浆中.HBX可能通过上调转染细胞中c-Myc蛋白的表达而使细胞具备恶性化生长的倾向. 相似文献
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乙肝病毒X基因真核表达质粒及细胞模型的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增HBVX基因,定向亚克隆入真核表达载体pRc/CMV2.构建重组质粒pCMV/X;采用脂质体法转染QSG7701细胞,筛选阳性细胞克隆;RT—PCR法检测HBV XmRNA的表达情况.Western blotting法鉴定HBx蛋白的表达,结果表明,构建的真核重组表达质粒pCMV/X中包含有完整的HBVX基因片断,pCMV/工转染的QSG7701细胞中有HBVXmRNA及HBx蛋白的稳定表达.成功建立了HBVX稳定转染的细胞系,为进一步探讨HBx在HCC的发生发展过程中所起的作用,提供了一个有价值的细胞模型. 相似文献
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乙型肝炎病毒全S基因疫苗诱导小鼠的特异性免疫应答 总被引:1,自引:0,他引:1
乙型肝炎病毒(HBV)感染是我国常见病及多发病.HBV难以清除的原因之一就是机体的免疫功能障碍.目前虽然基因重组HBV表面抗原(HBsAg)疫苗预防HBV感染取得了较好的效果,但基因重组HBsAg疫苗主要能诱导特异性体液免疫,不能刺激机体的细胞免疫应答.近年来发现基因疫苗可诱导机体产生细胞及体液免疫反应,特别是诱导细胞免疫反应的能力优于蛋白、多肽类疫苗,更适应于慢性病毒感染的预防与治疗[1,2].为了探讨应用HBV基因疫苗预防HBV感染的可能性,本文构建了HBV全S基因和HBsAg基因疫苗,观察和比较了这两种疫苗经肌肉注射接种到Balb/C小鼠体内后的细胞及体液免疫功能的变化. 相似文献
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利用OPA、FMOC联合在线衍生反相高效液相色谱法测定白肋烟在110℃、120℃、130℃、140℃、150℃分别烘焙12m in和16 m in后游离氨基酸的含量,研究烘焙温度和烘焙时间对白肋烟中游离氨基酸的影响。结果显示整个烘焙过程是蛋白质的降解和M ailard反应相结合的动态过程,蛋白质的降解主要发生在110℃~120℃的低温区;而M ailard反应主要发生在130℃~150℃高温区。实验结果还表明烘焙时间对白肋烟在烘焙后游离氨基酸的含量有重要影响,烘焙时间的延长使烟叶中的游离氨基酸均有较大幅度降低,其中影响最明显的是Pro、Asp和Asn。 相似文献
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