应用多重RT—PCR技术检测食管癌患者外周血多种肿瘤基因标志物的研究

目的:建立多重RT-PCR同步检测技术,联合检测黑色素瘤抗原MAGEA3基因、人类斯钙素hsTC1基因、上皮细胞角质蛋白CK20、CK19基因及癌胚抗原CEA基因mRNA在食管癌患者外周血中的表达。方法:在分析MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19、CEA和β-actin六种基因mRNA全长序列资料的基础上,自行设计并筛选出6对引物及6条寡核苷酸探针,利用多重RT-PCR技术并结合基因芯片对样本进行检测。结果:全部样品均可检出β-actin,55例食管癌患者外周静脉血中MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA的阳性表达率分别为25.45%、47.27%、49.09%、34.55%和52.73%;多重RT-PCR技术同时检测MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA基因,如果至少表达其中一种即可作为阳性表达者,其阳性表达率可达72.73%。而10例食管癌组织中均为阳性,28例正常健康捐献者的外周血中有2例CEA表达阳性,27例非肿瘤病人的外周血中有3例CK20阳性,3例CK19阳性,3例CEA阳性。测序结果证实RT-PCR产物确为MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA基因。结论:联合检测MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA可以增加外周血循环癌细胞检测的敏感性,本研究建立的多重RT-PCR技术可以做为一种快速、灵敏的检测手段。     

一种新型肿瘤细胞抑制蛋白的分离纯化

介绍了从健康牛骨髓中分离到一种具有抑制肿瘤活性的糖蛋白,并对该糖蛋白进行了纯化,获得了电泳纯和层析纯的纯品．测得该糖蛋白N末端为两氨酸残基．用SDS-PAGE法测得该溏蛋白的表现分子量为65kD．氨基酸组成分析显示其为一种富含丝氨酸的蛋白质．生物活性测定表明,该糖蛋白纯品对小白鼠白血病P388细胞和人慢粒白血病HL-60细胞株的增殖均有抑制作用．有关该糖蛋白的糖含量的定量测定及蛋白质一级结构分析正在进一步的研究中．     

电化学方法在李斯特氏菌毒力基因检测中的应用

单核李斯特氏菌(Listeria monocytogenes, LM)是食源性李斯特氏病的病源菌, 该病可引起败血病、脑膜炎、流产等。李斯特氏菌的毒力因子listeriolysin O (LLO)是引发李斯特氏病的主要原因。文章使用一种特殊的电化学方法从样品中检测编码LLO的hlyA基因。该方法以化合物Nhydroxysulfosuccinimide (NHS) 和 N-(3-dimethylamion) propyl- N'-ethyl carbodiimidehydrochloride (EDC) 作为激活剂, 使单链DNA探针结合到金电极表面组成工作电极, 以[Co(phen)₃](ClO₄)₃ 作为指示剂来检测循环伏安曲线(Cyclic voltammetry , CV), 通过CV峰值的变化来估算hlyA基因的含量, 从而确定LM的污染情况。这种新颖的电化学方法用于免标记的目标DNA的杂交检测, 具有快速和方便的特点。     

应用多重RT-ORC技术检测食管癌患者外周血多种肿瘤基因标志物的研究

目的:建立多重RT-PCR同步检测技术,联合检测黑色素瘤抗原MAGEA3基因、人类斯钙素hSTC1基因、上皮细胞角质蛋白CK20、CK19基因及癌胚抗原CEA基因mRNA在食管癌患者外周血中的表达.方法:在分析MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19、CEA和B-actin六种基因mRNA全长序列资料的基础上,自行设计并筛选出6对引物及6条寡核苷酸探针,利用多重RT-PCR技术并结合基因芯片对样本进行检测.结果:全部样品均可检出B-actin,55例食管癌患者外周静脉血中MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA的阳性表达率分别为25.45%、47.27%、49.09%、34.55%和52.73%;多重RT-PCR技术同时检测MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA基因,如果至少表达其中一种即可作为阳性表达者,其阳性表达率可达72.73%.而10例食管癌组织中均为阳性,28例正常健康捐献者的外周血中有2例CEA表达阳性,27例非肿瘤病人的外周血中有3例CK20阳性,3例CK19阳性,3例CEA阳性.测序结果证实RT-PCR产物确为MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA基因.结论:联合检测MAGEA3、hSTC1、CK20、CK19和CEA可以增加外周血循环癌细胞检测的敏感性,本研究建立的多重RT-PCR技术可以做为一种快速、灵敏的检测手段.