表达新城疫病毒F48E8株血凝素—神经氨酸酶的重组鸡痘病毒的构建 …

在克隆和鉴定新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８株血凝素－神经氨酸酶（ＨＮ）基因的基础上,应用分子克隆技术将ＨＮ基因导入鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５－１中启动子Ｐ７．５的下游,得到携带ＮＤＶ－ＨＮ基因的质粒ｐＦＧＨＮ１１７５－１。将此质粒ｐＦＧＨＮ１１７５－１以脂质体转染中国鸡痘病毒疫苗株２８２Ｅ４株感染３￣４ｈ的鸡胚成纤维细胞,采用蓝斑筛选方法纯化３次,得到稳定的重组鸡痘病毒。用ＮＤＶ－ＨＮ基因特异     

表达新城疫病毒F48E8株血凝素-神经氨酸酶的重组鸡痘病毒的构建和鉴定

在克隆和鉴定新城疫病毒（NDV）F48E8株血凝素－神经氨酸酶（HN）基因的基础上,应用分子克隆技术将HN基因导入鸡痘病毒插入载体pFG1175－1中启动子P7．5的下游,得到携带NDV-HN基因的质粒pFGHN1175－1。将此质粒pFGHN1175－1以脂质体转染中国鸡痘病毒疫苗株282E4株感染3～4h的鸡胚成纤维细胞,采用蓝斑筛选方法纯化3次,得到稳定的重组鸡痘病毒。用NDV—HN基因特异性探针进行斑点杂交试验以及用HN基因特异性引物作PCR检测,表明NDV—HN基因已插入鸡痘病毒基因组中。以NDV－HN蛋白特异性单克隆抗体进行间接免疫荧光试验,证实重组鸡痘病毒在感染细胞中表达了HN糖蛋白,从而成功建立了表达新城疫病毒F48E8株血凝素-神经氨酸酶的重组鸡痘病毒。