脑型一氧化氮合成酶的钙调蛋白结合区的表达及活性鉴定

用PCR法克隆出nNOS的CaM结合区基因(nNOS 2455～2988bp),并在大肠杆菌中进行了高效表达。经金属离子螯合亲和层析得到纯度为90％以上的重组蛋白．分子量为22kDa,CaM Oveday assay证实该蛋白具有CaM的结合活性。由于所表达的重组蛋白既具有序列特异性又具有CaM的结合活性．因此。可将它作为筛选nNOS特异性抑制肽的靶蛋白,亦可用于特异性抗体的制备。     

重组人白细胞介素－2在离子色谱分离时的复性

采用ＨＰＩＥＣ应用ＣＭ交换柱分离纯化Ｅ．ｃｏｌｉ工程菌表达的ｒＩＬ－２,与空气氧化复性相比较,又有１倍以上的变性ｒＩＬ－２在色谱过程中得到复性,且溶液ｐＨ影响ｒＩＬ－２的复性和纯化效果：ｐＨ７．０时ｒＩＬ－２复性率高于ｐＨ８．０时,但纯度明显低于ｐＨ８．０时分离的ｒＩＬ－２．     

重组白细胞介素-2纯化过程中影响活性的因素探讨

<正> 白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是一种重要的免疫调节剂,具有促进T细胞增殖和分化,调节NK细胞活性,诱导LAK等功能,在肿瘤治疗上有广泛的应用前景。我们的前文就重组菌中IL-2包含体的制备、性质及重组rIL-2的纯化进行了研究,本文就重组rIL-2纯化过程中影响其活性的有关因素进行了探讨。     

大肠杆菌表达的重组白细胞介素-2的初步纯化

本文对大肠杆菌表达产生的重组白细胞介素-2进行了纯化研究。通过比较两种方法制备的rIL-2包含体的纯度,发现用4mol/L脲溶解可溶性细菌蛋白后可使rIL-2包含体纯度达70％;在高浓度变性剂条件下进行凝胶过滤,解决了rIL-2易聚合的问题;结合透析,利用空气氧化形成高活性氧化型rIL-2;经SephadexG-100凝胶过滤,DEAE离子交换等步骤纯化,得到了均一性rIL-2,纯度达98％,比活达4.3×10~6u/mg蛋白,得率为30.8％。     

内皮型氧化氮合酶FAD间区在大肠杆菌中的表达

为了研究内皮型氧化氮合酶(eNOS)的功能、功能调节以及结构与功能的关系.通过PCR技术克隆出eNOSFAD间区801～902AA肽段的编码基因,插入pET-28a(+)表达质粒中构建成pET-28a/eNOS₂重组表达质粒,经转染在大肠杆菌中成功表达.表达蛋白经金属离子螯合亲和层析和SDS-PAGE回收纯化,得蛋白质纯品.为eNOS特异性抑制肽的筛选和eNOS特异性抗体的制备提供了必要的准备.     

反相高压液相色谱折叠重组人白细胞介素-2

重组人白细胞介素２（ｒｈＩＬ２）基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过菌体发酵和收集、超声破菌、包涵体抽提、稀释透析初步复性、反相高压液相色谱纯化,终产物纯度大于９９％。反相高压液相色谱不仅可以纯化ｒｈＩＬ２,且使产物的总活性提高７９～９倍,比活性提高１４～１８倍,达到１５×１０７ｕ／ｍｇ蛋白质,蛋白得率为５０％～５６％。结果表明,反相高压液相色谱具有纯化和显著提高ｒｈＩＬ２折叠效率的双重功效,为非ＳＤＳ变复性法生产ｒｈＩＬ２提供了简便有效的方法     

重组人巨噬细胞集落刺激因子的结构与功能

重组人粒细胞──巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF) 已经在原核、真核细胞表达并得到纯品,为它的结构与功能研究提供了有利条件．目前国内外对于rhGM-CSF的结构与功能研究主要集中在晶体结构、化学修饰、溶液中构象和稳定性以及突变和分子设计方面．分子结构与功能的关系以及与GM-CSF受体作用机理研究也取得了突破性进展．     

内皮型氧化氮合酶FAD间区在大肠杆菌中的表达

为了研究内皮型氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）的功能、功能调节以及结构与功能的关系．通过ＰＣＲ技术克隆出ｅＮＯＳＦＡＤ间区８０１～９０２ＡＡ肽段的编码基因,插入ｐＥＴ２８ａ（＋）表达质粒中构建成ｐＥＴ２８ａ／ｅＮＯＳ２重组表达质粒,经转染在大肠杆菌中成功表达．表达蛋白经金属离子螯合亲和层析和ＳＤＳＰＡＧＥ回收纯化,得蛋白质纯品．为ｅＮＯＳ特异性抑制肽的筛选和ｅＮＯＳ特异性抗体的制备提供了必要的准备     

MTT法快速测定TNF活性

肿瘤坏死因子(TNF)能特异地杀伤肿瘤细胞,对正常组织无明显的毒性作用,因而受到人们的普遍关注。近年来的研究发现,TNF还具有抗病毒、兔疫调节、伤口愈合等作用,同时临床研究也表明,体内TNF量异常与肿瘤、感染、自身免疫等均有关系。因此,建立一个简易、快速、稳定的TNF检测方法对基础理论的研究,尤其是临床上的普及应用是非常必须的。     

反相高压液相色谱折叠重组人白细胞介素-2

重组人白细胞介素－２（ｒｈＩＬ－２）基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过菌体发酵和收集、超声破菌、包涵体抽提、稀释透析初步复性、反相高压液相色谱纯化,终产物纯度大于９９％。反相高压液相色谱不仅可以纯化ｒｈＩＬ－２,且使产物的总活性提高７．９－９倍,比活性提高１４￣１８倍,达到１．５×１０＾７ｕ／ｍｇ蛋白质,蛋白得率为５０％￣５６％。结果表明,反相高压液相色谱具有纯化和显提高ｒｈＨ