蝮蛇清栓酶治疗冠心病159例临床研究

沈阳军区卫生部组织八个医院用东北蝮蛇毒制剂清栓酶治疗冠心病159例,按“WHO”关于冠心病诊断标准,选择41岁以上,有心绞痛症状并有心电图 ST-T 改变为观察对象,按1979年9月全国中西医结合防治冠心病,心绞痛会议修定标准判定疗效。159例中心绞痛显效率73.5%,总有效率96.2%,对照组用低分子右旋糖酐加辅酶 A、ATP、维生素丙治疗85例,显效率22.3%,总有效率77.6%,两组疗效比较差异非常显著(P<0.01)。心电图 ST-T 缺血改变,治疗组显效25.2%,总有效率79.3%,对照组显效率8.2%,总有效率52.9%两组比较差异非常显著(P<0.01)。为验证清栓酶对冠心病疗效。又用兔冠心病造型,将高胆固醇食连续喂养四个月,兔血管出现脂斑或脂纹沉积等,动脉硬化后,用酐角素致心肌缺血,心电图出现 ST-T 缺血性改变,Q 波、二、三、四、五联律、传导阻滞、房颤等十二余种异常图形。随机分两组,分别用清栓酶及生理盐水静脉给药3天,治疗组除1例房颤无效外,其余11种异常图型均消失,生理盐水治疗组恢复正常慢、少,证实清栓酶对冠心病疗效。又用家兔肠系膜血管造成人工血栓,分别给予清栓酶及生理盐水治疗十天将兔处死剖检,清栓酶组80%血栓消失,而生理盐水组只10%血栓消失,说明清栓酶对兔急性血栓有溶解之效。还进行了对动物“狗”抗凝效应,对大白鼠血小板聚集功能的影响实验,又证实清栓酶有降低血浆纤维蛋白原、降低血液粘度及血小板聚集和粘附,还有降血脂作用,阐明了清栓酶治疗冠心病的机理。     

人Mn-SOD cDNA的克隆及其在巴斯德毕赤酵母中的表达

以人肝细胞株(L02)总RNA为模板,用RT-PCR扩增出人锰超氧化物歧化酶(hMn-SOD)cDNA,将其插入含有AOX1基因启动子和α分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9k,构建重组质粒pPIC9k-MnSOD,转化毕赤酵母GS115,筛选出整合了多拷贝hMn-SOD基因的Mut^ 表型菌株,摇瓶培养,0．5％甲醇诱导表达。SDS-PAGE分析显示,诱导4d的培养上清中hMn-SOD的表达量约为上清总蛋白的32％,酶比活可达247、7u／mg。hMn-SOD在巴斯德毕赤酵母中实现了分泌性表达。     

杉林细柄阿丁枫混交林涵养水源功能和土壤肥力的研究

对25年生杉木细柄阿丁枫混交林进行研究表明：混交林对土壤的物理性质、养分含量、酶活性和涵养水源功能均有良好的作用。混交林林分持水量为2212.84t/hm^2,杉木纯林为1841.62t/hm^2。混交林土壤水稳性团聚体组成、孔隙组成和水分状况均比纯林好／混交林土壤养分含量比弛林高,0－20cm层有机质含量比纯林增加80.5%,全氮,全磷、水解性氮、速效磷和速效钾含量分别比纯林提高28.8%、39.8%、32.0%、56.6%和76.8%;混交林土壤酶活性比杉木纯林高,0－20cm层转化酶、脲酶、酸性磷酸酶和过氧化氢酶活性分别比纯林增加156.1%、72.6%、30.0％和10.3%。     

不同强度疏伐改造对马尾松林分水源涵养功能时空格局的影响

为了解马尾松林分改造过程中水源涵养功能的动态变化,提升林分的生态服务功能,1994年在福建省尤溪国有林场城镇景观林中选择22年生的马尾松林,通过方差分析分析20%强度疏伐改造、35%强度疏伐改造、50%强度疏伐改造和对照4种处理间林分持水量的变化,结果表明:随着改造时间的推移,各处理林分水源涵养量显著升高(P0.05),疏伐改造强度越大林分水源涵养量增加越明显。土壤层持水量占林分总持水量的95.89%—97.18%,改造前5 a不同处理间土壤层0—20 cm和土壤层20—40 cm持水量差异均不显著(P0.05),改造10 a后改造林分土壤层0—20 cm和土壤层20—40 cm持水量均显著高于对照林分(P0.05)。林分地上部分持水量仅占林分水源涵养量的2.82%(45.64 t/hm~2)—4.11%(76.81 t/hm~2),但改造后存在显著变化(P0.05)。林冠层在林分改造10a后持水量显著高于对照林分(P0.05),但疏伐改造强度越大其持水量越小;林下植被层在林分改造5 a后持水量显著低于对照林分(P0.05),同样疏伐改造强度越大其持水量越小;凋落物层在林分改造5 a后持水量显著高于对照林分(P0.05),持水量随疏伐改造强度增大而增大。林冠层和凋落物层持水量比重随着改造时间的推移呈显著增加趋势(P0.05),林下植被层则呈显著下降趋势(P0.05)。以上结果表明,改造初期林分持水量变化强烈,疏伐改造强度越大林分持水量越低;但长期来看,改造林分更有利于林分水源涵养功能的提升。     

鸟分枝杆菌PPE25蛋白对THP-1巨噬细胞免疫效应的影响

[目的]探讨鸟分枝杆菌PPE25在调控人源THP-1巨噬细胞免疫应答反应中的作用及机制.[方法]通过基因扩增、载体构建、诱导表达、分离纯化等过程制备鸟分枝杆菌重组PPE25蛋白;将重组PPE25蛋白作用于THP-1巨噬细胞后,利用流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率;运用ELISA方法检测细胞上清中TNF-α的浓度;采取Wes...     

康氏木霉中调控纤维素酶形成的两个调控因子的克隆及功能性分析

锌指蛋白ACEI和Xyrl是里氏木霉中调控纤维素酶和木聚糖酶形成的两个调控因子,它们能竞争性结合木聚糖酶基因xynl的启动子.为进一步研究ACEI和Xyr1调控纤维素酶基因表达的机制,本研究利用PCR技术扩增康氏木霉ACEI和Xyr1 DNA结合区的基因序列,并使其在大肠杆菌中得到表达.凝胶迁移率移动试验表明ACEI和Xyrl的DNA结合区均可与纤维素酶基因cbh1启动子的287 bp序列特异性结合.提示ACEI与Xyr1不仅能竞争性结合xynl启动子,也能竞争性结合cbhl启动子.     

鸟分枝杆菌PhoP功能分析及其基因突变株的构建

【目的】对鸟分枝杆菌PhoP的功能进行分析及构建PhoP基因突变株,为深入研究PhoP的调控机制打下基础。【方法】利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP DNA结合区(PhoPC)编码序列,与表达载体p GEX-4T-3连接后,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达GST-PhoPC融合蛋白。用凝血酶去除GST标签,制备PhoPC蛋白;利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP基因及其下游基因MAV0127、PhoU和Amt的启动子片段,采用凝胶迁移率移动试验(EMSA)分别检测PhoPC与PhoP、MAV0127、PhoU和Amt的启动子结合的情况。通过PCR扩增PhoP基因上、下游片段,构建PhoP基因缺失性同源核苷酸片段,与自杀质粒p GMB151连接后,通过电转化导入鸟分枝杆菌进行同源交换,利用PCR筛选出PhoP基因缺失突变株。【结果】EMSA结果显示,鸟分枝杆菌PhoP能与PhoP、MAV0127及Amt基因启动子结合,不能与PhoU结合。通过PCR和序列分析证实基因突变株的PhoP基因缺失了309个碱基。【结论】PhoP不仅可调控其下游基因MAV0127和Amt的转录水平,还可调控其自身基因的转录,但不参与调节PhoU二元调控系统。构建了PhoP基因缺失突变株,为进一步研究其在鸟分枝杆菌的调控功能奠定了基础。     

麻黄中抑制补体溶血物质的作用

 <正> 大部份急性肾炎的发病过程是由免疫复合物引起补体活化,释放出化学趋化因子和过敏毒素,吸引白细胞,破坏肾小球基底膜和细胞,可见急性肾炎与补体活化有很大关系,祖国医学用中药治疗急性肾炎积累了丰富的经验,对近十余年发表的中医治疗急性肾炎的有效方剂分析,发现许多方剂都有麻黄,实验证明麻黄中有强烈抑制补体溶血活性的物质存在;其可能机制之一是抑制C_3转化酶EAC142形成;这一物质不是麻黄硷,是一种在pH8.5沉淀,于pH7.0溶解的物质。     

Smac调控Caspase-3对耐药肺腺癌细胞株生物活性及相关信号的研究

摘要 目的：探讨Smac基因调控Caspase-3表达对紫杉醇耐药肺腺癌细胞株生物活性及经典凋亡信号通路的作用机制。方法：取构建好的耐药A549细胞,将其分为A549细胞（LC）组、A549细胞+Smac-NC（SN）组、A549细胞+Smac抑制剂（SI）组、A549细胞+Smac激动剂（SM）组、A549细胞+Caspase-3-NC（CN）组、A549细胞+Caspase-3抑制剂（CI）组、A549细胞+Caspase-3激动剂（CM）组、A549细胞+Smac激动剂+Caspase-3激动剂（MM）组;Real-time PCR法检测正常肺上皮细胞及4种肺腺癌细胞系中Smac、Caspase-3表达水平,将阴性对照、Smac、Caspase-3类似物转染至紫杉醇耐药肺腺癌细胞株,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫印迹法检测经典凋亡信号通路表达,并分析Smac与Caspase-3的相关性。结果：肺腺癌细胞系中的Smac、Caspase-3 mRNA表达量显著低于正常肺上皮细胞系BEAS-2B（P＜0.05）,其中A549的Smac、Caspase-3 mRNA值最小（P＜0.05）,因此选取其作为此次实验细胞;LC组与SN组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与SN组相比,SI组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显降低（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）,与SI组相比,SM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;LC组与CN组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与CN组相比,CI组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显降低（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显升高（P＜0.05）,与CI组相比,CM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;SM组与CM组相比,细胞增殖率、凋亡率及Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyto-C蛋白表达基本无差异（P＞0.05）,与CM组相比,MM组细胞凋亡率及Caspase-3、Bax、Cyto-C蛋白表达明显升高（P＜0.05）,增殖率、Bcl-2表达明显降低（P＜0.05）;Smac与Caspase-3呈现正相关（r=0.470,P=0.002）,组间具有显著差异。结论：Smac基因可显著改善紫杉醇耐药肺腺癌细胞株细胞生物活性,并激活经典凋亡信号通路,其作用机制可能与调控Caspase-3表达有关。     

马链球菌透明质酸合成酶基因的分子克隆及表达

根据Streptococcus equisimilis、Streptococcus pyogenes、Streptococcus uberis三种链球菌透明质酸合成酶(seHAS、spHAS、suHAS)基因的高度保守区,设计一对简并引物,用两次PCR从Streptococcus equi的总DNA中扩增出sqHAS基因。构建表达质粒pSE-sqHAS并转化大肠杆菌DH5α,诱导培养后在细胞膜中检测到sqHAS蛋白及活性。利用携带该酶的细胞膜以UDP-GlcA和UDP—GlcNAc为底物在体外合成了分子量为3.6×10~6Da的HA,分别是发酵法生产和提取法生产的HA的分子量的2.5倍和5倍左右。马链球菌透明质酸合成酶基因的克隆及表达,国内外文献尚未见报道。本研究为体外酶法生产透明质酸做了初步探索。