蛋白芯片生产用醛基化玻片制备的条件优化及初步检定

建立一种以玻片为基质的蛋白芯片制备的优化及检定方法。将经过清洗处理的玻片,用不同浓度的氨基硅烷试剂和戊二醛试剂,在不同的时间内,进行氨基化和醛基化处理,通过蛋白结合强度与处理时间及溶剂浓度的动力学相关性分析,确定最佳的优化条件,将不同浓度梯度的人IgG抗体结合于该玻片表面,经过洗涤、封闭,再加入Cy3荧光标记的二抗,孵育,洗涤后检测各点的荧光强度,确定其线性范围及其检测灵敏度。氨基硅烷试剂浓度为5%,作用时间为30min;戊二醛试剂浓度为2.5%,作用时间为60min时,蛋白结合强度达到饱和。蛋白芯片在2～2×4-7mg/ml浓度范围内有良好的线性,能够检测出人IgG的最低浓度为2×4-8mg/ml。     

同时检测血清中多种抗体的蛋白质微阵列研究

建立一种用蛋白质微阵列法可同时检测血清中艾滋病毒（HIV）, 丙型肝炎病毒（HCV）和梅毒螺旋体（TP）抗体的方法.将基因工程HIV、HCV和TP 3种融合抗原共价结合于固相载体玻片上,制成蛋白质微阵列,血清样本经稀释、加样、孵育、洗涤后,加上Cy3荧光标记二抗,洗涤,激光共聚扫描,将获得的图片用Bio-discover公司的Imagene专用分析软件进行分析,所获数据在经过自行编写的软件,根据Cutoff值自动生成判断结果.用此蛋白质微阵列系统检测了400例阴性血清,确定了Cutoff值,检测中国药品生物制品检定研究所的HIV, HCV和TP 3种参比品,并与3种ELISA试剂盒的结果进行了比较.蛋白质微阵列的艾滋病毒阳性和阴性符合率均为100%(20/20); 丙型肝炎病毒阳性和阴性符合率均为95%(38/40).梅毒螺旋体参比品阳性符合率为100%(10/10),阴性符合率为100%(20/20),蛋白质微阵列与三种ELISA试剂检测国家HIV、TP、HCV参比品（共150份血清样本）,结果具有高度的符合率.