TMAO对脾虚高脂血症大鼠脂代谢的影响及香砂六君子汤的干预作用

目的 本研究拟探讨肠道菌群代谢物TMAO对脾虚高脂血症大鼠肝脂质代谢的影响,并进一步探讨香砂六君子汤干预肝脂质代谢紊乱的可能机制。方法 SD大鼠分为：空白对照组(C组);空白对照组+DMB(C+D组),DMB为TMAO抑制剂;脾虚高脂血症组(PG组);脾虚高脂血症+DMB组(PG+D组);脾虚高脂血症+香砂六君子汤组(PG+XS组)。除C组、C+D组外各组构建以劳倦过度和高脂饲料相结合建立脾虚高脂血症模型(造模12周),模型建立后C+D组、PG+D组每天饮用水中给予1%DMB,PG+XS组每天灌胃香砂六君子汤(每天11.34 g生药/kg),其余给予等量生理盐水,4周后进行取材检测。全自动生化仪检测大鼠血脂含量;HE染色、油红O染色观察大鼠肝变化及脂质沉积情况;ELISA法检测大鼠肝FFA变化;试剂盒法检测各组大鼠TG、TC含量;LC-MS法检测大鼠血浆TMAO含量;qRT-PCR法检测大鼠肝PERK、FOXO1、SREBP-2、ABCA1、miR-33 mRNA相对表达水平;Western Blot检测大鼠肝SREBP-2、ABCA1蛋白表达。结果 (1)PG组大鼠血清中TC、TG和...     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJ株致弱过程中遗传变异和致病性分析

为了研制高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)弱毒疫苗,将高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)TJ株进行了致弱驯化,在Marc-145细胞上对其进行了连续传代,每5～10代进行噬斑克隆纯化病毒。对致弱过程中不同代次病毒进行遗传变异及致病性分析。结果表明,TJ株在致弱过程中各基因均存在不同程度的变异,至第140代,共有58个氨基酸发生突变,同时在非结构蛋白nsp2区域,在不连续的30个氨基酸缺失(481位和533～561位)之后又出现连续120个氨基酸的缺失,与VR-2332相比,该缺失位点位于推定氨基酸序列的628～747位。动物接种试验结果表明,TJ株经Marc-145细胞传至第20代时,病毒对猪的致病性明显减弱,推测TJ株在这一传代过程中非结构蛋白nsp2-nsp5、nsp7和结构蛋白GP5所发生的遗传变异对病毒毒力致弱起到一定作用。     

大鼠热休克蛋白70的融合表达及纯化鉴定

目的：在大肠杆菌中高效表达并纯化大鼠热休克蛋白（HSP）70与麦芽糖结合蛋白（MBP）的融合蛋白,以进一步研究细胞外HSfr70的生物学功能。方法：用RT-PCR方法扩增目的基因,并将其克隆到原核表达载体pMAL-c2X中,酶切鉴定并进行DNA测序;将该重组表达载体转化大肠杆菌B121,用IPTG在不同温度及时间下进行诱导表达,建立最佳诱导表达条件;采用Amylose树脂预装柱对目的蛋白进行亲和纯化,并对不同表达条件下的产物进行SDS-PAGE及Westernblot分析。结果：克隆出目的基因,构建了融合表达载体pMAL-c2X／hsp70;诱导表达后经SDS-PAGE检测表明获得了目的条带,并纯化出纯度较高的融合蛋白;免疫印迹鉴定表明其具有抗原活性。结论：在大肠杆菌中高效表达并纯化了融合蛋白MBP-HSP70,为进一步研究细胞外HSP70的生物学效应提供了有用的材料。     

酵母双杂交筛选心脏cDNA文库中与人热激蛋白70相互作用的蛋白质

目的:利用酵母双杂交系统从人心肌cDNA文库中筛选与热激蛋白70(HSP70)相互作用的蛋白质。方法:从人心脏cDNA文库扩增Hsp70基因,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-Hsp70酵母细胞AH109中的自激活活性;将构建的酵母表达诱饵质粒载体pGBKT7-Hsp70转化AH109酵母细胞,与转化有人心脏cDNA文库的酵母Yl87进行交配实验,筛选与HSP70相互作用的蛋白质,通过一对一的回复杂交实验排除假阳性,对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。结果:构建了"诱饵"质粒栽体pGBKT7-Hsp70,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活活性,筛选得到多个与Hsp70相互作用的阳性转化子,并最终得到HSP70的1个相互作用蛋白质HIP。结论:应用酵母双杂交系统筛选出与HSP70相互作用的1个蛋白质,它们的相互作用可能与HSP70发挥细胞分子伴侣作用有关。     

蟋蟀视觉系统的解剖结构与生理机能

蟋蟀视觉系统由单眼、复眼、视叶三部分组成。蟋蟀的单眼为背单眼,由角膜、角膜生成细胞、视网膜等组成,是提高昆虫复眼所感知的视觉刺激的兴奋水平部位;复眼是最主要的视觉器官,由角膜、晶锥、感杆束和网膜细胞、基膜组成,是光电转导和视觉级联反应的中心;视叶由神经节层、外髓和内髓组成,是视觉神经系统的中心。     

昆虫的听觉器官

昆虫的听器是一类对声波具有特异感受作用的器官,对其生存具有非常重要的意义。昆虫的听器主要有听觉毛、江氏器和鼓膜听器3种类型。本文主要介绍了昆虫3种听器的结构和功能特点,并从系统发生和个体发育角度介绍了鼓膜听器的演化过程。     

泛素C端水解酶L1的RNA干扰载体的构建及效果评价

目的:获得抑制效果好的泛素 C 端水解酶 L1(UCH-L1)基小干扰 RNA(siRNA)干扰载体.方法:根据 Gen?Bank 中大鼠 UCH-L1基序列设计并合成4对 siRNA 寡核苷酸序列,将4对寡核苷酸序列退火成双链后分别插入siRNA 表达载体 pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR 中构建4个 siRNA 表达质粒,测序鉴定后将4个 siRNA 表达质粒分别转染 HEK293细胞,利用 Western 印迹和 qPCR 方法检测干扰效果;将干扰效果最好的质粒包装成腺病毒,感染大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),并采用 TNFα干预诱导 UCH-L1表达升高,Western 印迹验证干扰效果.结果:测序分析证实4对 siRNA 寡核苷酸序列分别插入 siRNA 表达载体 pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR;qPCR 检测与 Western 印迹均表明第3号 siRNA 表达载体对 UCH-L1表达的抑制程度最高,将其包装成腺病毒并转染 VSMC 能显著抑制 TNFα诱导的UCH-L1表达升高.结论:构建并筛选出干扰效果好的 UCH-L1 siRNA 干扰载体.