检测人血清中肺炎球菌10A型荚膜多糖IgG抗体的包被抗原适用性研究

目的 确定用于23价肺炎多糖疫苗免疫后临床血清样本检测的包被用10A型肺炎球菌荚膜多糖(Pn10A)。方法 根据WHO推荐的检测人血清中肺炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量的ELISA(PnPSELISA),包被不同来源(ATCC、A公司、B公司、5个公司混合)的10A多糖[Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)、Pn10A(mix)],检测38份血清中Pn10AIgG抗体的几何平均浓度(GMC)和相同样本免疫前、后的阳转率(免疫后/免疫前≥2为阳转),确定用于临床血清检测的包被Pn10A。结果 用Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)包被检测38份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9);Pn10A(B)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异有统计学意义(P<0.05),数据一致性差(r<0.8);再以Pn10A(A)、Pn10A(ATCC)、Pn10A(mix)包被检测另46份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9),免疫前、后GMC值相近,阳转率相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)均可以作为包被多糖用于检测人血清中肺炎球菌Pn10AIgG抗体;但从长久使用相同抗原检测大批量临床样本的需求考虑,Pn10A(mix)更具有足量、经济的优势。     

重组铜绿假单胞菌外毒素A工程菌的高密度发酵与表达

高密度培养表达大肠杆菌生产重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)。用上海高机公司的30L自控发酵罐,采用分批补料培养技术,维持葡萄糖的浓度始终处于较低的水平,并分批补加氮源,同时溶氧控制在30%～40%,pH自动调控至7.0,培养至对数中期进行诱导。重组菌最终发酵液光密度(A600)未诱导时达到44,诱导时达到36,在上清液中表达的rEPA蛋白的含量占总蛋白的28.1%,在菌体中表达蛋白含量占总蛋白的4.7%。本实验为rE-PA的大规模生产奠定了基础。