单增李斯特菌溶血素O的PEST序列激活ERK1/2磷酸化的作用

[目的]本研究旨在构建单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)溶血素O(Listeriolysin O,LLO)的关键结构域PEST序列(包含S44、S48和T51关键磷酸化位点)突变体,并针对其生物学功能展开研究。[方法]以李斯特菌参考菌株EGD-e为模板扩增编码LLO的hly基因,克隆至pET30a(+)原核表达载体,在此基础上利用氨基酸突变技术获得表达PEST突变体(LLO△PEST、LLOS44A、LLOS48A和LLOT51A)的重组质粒,转入E.coli Rosetta感受态细胞中,诱导表达重组蛋白经镍离子亲和层析纯化后进行SDS-PAGE分析。利用红细胞裂解试验检测重组蛋白的溶血活性,并通过Western blotting检测重组突变蛋白刺激Caco-2细胞后对MAPK关键信号分子ERK1/2磷酸化水平变化的影响。[结果]结果显示,本研究成功获得重组LLO及其突变体蛋白LLO△PEST、LLOS44A、LLOS48A和LLOT51A。在pH5.5和7.4条件下,LLO△PEST、LLOS44A、LLOS48A和LLOT51A均具有和LLO相当的溶血活性,说明PEST序列缺失或突变并不影响LLO的膜裂解活性。研究进一步发现,重组LLO及其突变蛋白刺激Caco-2细胞后均能激活ERK1/2的磷酸化。[结论]研究表明LLO的关键结构域PEST序列对于维持该蛋白的膜裂解能力及穿孔活性并非必需,且该结构域的缺失不影响李斯特菌在感染宿主时依赖LLO介导ERK1/2磷酸化的生物学过程。本研究将为进一步探索细菌感染过程中PEST序列对于LLO发挥生物学功能的潜在作用及分子机制奠定基础。     

地衣芽孢杆菌对脂多糖诱导的仔猪肝脏炎症及抗氧化功能的影响

[目的]本文旨在研究地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis HJ0135)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)应激断奶仔猪肝脏指数、炎症因子、抗氧化功能及相关基因表达的影响。[方法]选择24头28日龄健康状况良好的三元杂交断奶仔猪(杜×长×大),随机分成4个试验组:对照组(control,CON),500 mg/kg地衣芽孢杆菌HJ0135组(BL)、LPS应激组(LPS)以及LPS+500mg/kg地衣芽孢杆菌HJ0135组(BL-LPS),在试验第28天,给LPS组和BL-LPS组仔猪腹腔注射1.5 mL浓度为1 mg/mL的LPS,给CON组和BL组仔猪注射等量生理盐水,1.5 h后屠宰并采样。[结果]与CON组相比,BL组血清谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)的含量降低,肝脏的总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)提升且过氧化氢酶(catalase,CAT)和总超氧化物歧化酶(total...