Let-7a下调k-Ras和c-Myc癌基因的表达抑制肾癌细胞增殖

目的：MicroRNA 是近年发现的一类单链小分子RNA,对它的研究已成为一个新的热点。最近的研究发现,1et-7a 在细胞内影响着基因的表达调控,在疾病发生中起着及极重要的作用,尤其是在肿瘤的发展过程中,let-7a扮演着不可替代的角色。本文主要研究let-7a 在肾癌细胞株中的表达情况及其调控的靶基因、抑制细胞增殖的机制,对探索肾癌的致病基因,寻求肾癌新的治疗途径有重要意义。方法：应用化学合成的let-7a 模拟物（mimics）用脂质体Lipofectamine 2000 在体外瞬时转染786-O 和Caki-1肾癌细胞株,转染48 小时后采用荧光定量RT-PCR的方法检测let-7a 及c-Myc、k-Ras mRNA的表达情况,Western blot 检测这两株肾癌细胞转染了let-7a mimics 后c-Myc 及k-Ras 蛋白的表达变化;转染let-7a mimics 后分别在24、48、72 小时三个时间点用CCK-8 试剂盒检测对肾癌细胞株增殖的影响。结果：786-O 和Caki-1 肾癌细胞株中let-7a 的表达量明显低于正常肾小管上皮细胞株HK-2（P〈0.05）; 转染了let-7amimics的786-O 和Caki-1 肾癌细胞株,RT-PCR 及Western blot 结果显示c-Myc、k-Ras 在基因及蛋白的表达水平明显下调（P〈0.05）;CCK-8 检测结果显示转染了let-7a mimics的肾癌细胞株细胞增殖能力明显明显受到抑制,与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：Let-7a 在在肿瘤细胞与正常细胞中存在明显差异,let-7a 通过调控c-Myc、k-Ras的表达能抑制肾癌细胞增殖。Let-7a mimics 可以抑制肾癌细胞的增殖,因此上调Let-7a 的表达有可能成为肾癌基因治疗的一种有效治疗手段。     

Let-7a 下调 k-Ras 和 c-Myc 癌基因的表达抑制肾癌细胞增殖

摘要 目的： MicroRNA 是近年发现的一类单链小分子 RNA, 对它的研究已成为一个新的热点。最近的研究发现, 1et-7a 在细胞内 影响着基因的表达调控,在疾病发生中起着及极重要的作用, 尤其是在肿瘤的发展过程中, let-7a 扮演着不可替代的角色。本文主 要研究 let-7a 在肾癌细胞株中的表达情况及其调控的靶基因、 抑制细胞增殖的机制,对探索肾癌的致病基因, 寻求肾癌新的治疗 途径有重要意义。 方法： 应用化学合成的 let-7a 拟物（ mimics ）用脂质体 Lipofectamine 2000 在体外瞬时转染 786-O 和 Caki-1 肾 癌细胞株, 转染 48 小时后采用荧光定量 RT-PCR 的方法检测 let-7a 及 c-Myc、 k-Ras mRNA 的表达情况, Western blot 检测这两株 肾癌细胞转染了 let-7a mimics 后 c-Myc 及 k-Ras 蛋白的表达变化;转染 let-7a mimics 后分别在 24、 48、 72 小时三个时间点用 CCK-8 试剂盒检测对肾癌细胞株增殖的影响。 结果： 786-O 和 Caki-1 肾癌细胞株中 let-7a 的表达量明显低于正常肾小管上皮细胞 株 HK-2 （P<0.05 ） ; 转染了 let-7amimics 的 786-O 和 Caki-1 肾癌细胞株, RT-PCR 及 Western blot 结果显示 c-Myc、 k-Ras 在基因及 蛋白的表达水平明显下调 （P<0.05 ） ; CCK-8 检测结果显示转染了 let-7a mimics 的肾癌细胞株细胞增殖能力明显明显受到抑制, 与 阴性对照组比较差异有统计学意义 （P<0.05 ）。结论： Let-7a 在在肿瘤细胞与正常细胞中存在明显差异, let-7a 通过调控 c-Myc、 k-Ras 的表达能抑制肾癌细胞增殖。 Let-7a mimics 可以抑制肾癌细胞的增殖,因此上调 Let-7a 的表达有可能成为肾癌基因治疗的 一种有效治疗手段。