中心体蛋白Cenexin在大鼠精子发生过程中的表达特征

中心体蛋白Cenexin是成熟中心粒的唯一标志分子。为阐明中心粒在大鼠精子发生中的成熟以及功能,我们首先通过RT－PCR技术从大鼠睾丸组织中扩增出了Cenexin cDNA片段,原核表达重组蛋白后,用其免疫小鼠制备了高滴度的抗Cenexin的多克隆抗体,然后利用免疫荧光染色、Western Blot和半定量RT－PCR方法,研究了大鼠精子发生过程中Cenexin蛋白和基因的表达特征。结果显示Cenexin mRNA水平在精原细胞和精母细胞中较高,随后表达水平下降,而蛋白质分子在精原细胞到精子细胞中都定位于细胞的一个中心粒上,表示有成熟中心粒的存在,在长形精子细胞中该蛋白位于鞭毛的基体部。附睾的绝大多数成熟精子中Cenexin免疫染色消失。中心体蛋白Cenexin在精子变态期的表达变化可能与精子鞭毛形成的起始有关。     

The cloning and expression characterization of the centrosome protein genes family (centrin genes) in rat testis

Centrins are members of the centrosome protein family, which is highly conserved during revolution. The homologous genes of centrin in many organisms had been cloned, but the sequences of the rat centrin genes were not reported yet in GenBank. We cloned the cDNA fragments of centrin-1, -2 and -3 from the rat testis by RT-PCR, and analyzed the homology of the deduced amino acid sequences. The expression characterization of centrin genes in rat spermato-genesis was carried out by semi-quantitative RT-PCR. The results show that the homology of the corresponding centrin proteins in human, mouse and rat is high. The expression of centrin-1 is testis-specific, spermatogenic cell-specific and developmental stage-related. Centrin-1 begins to be transcribed when the meiosis occurs, and its mRNA level reaches the peak in round spermatids. Centrin-2 and centrin-3 are highly expressed in spermatogonia and their mRNA level decreases markedly when meiosis occurs. These results suggest that centrin-1 may play roles in     

中心体蛋白Cenexin在大鼠精子发生过程中的表达特征

中心体蛋白Cenexin是成熟中心粒的唯一标志分子。为阐明中心粒在大鼠精子发生过程中的成熟以及功能,我们首先通过RT-PCR技术从大鼠睾丸组织中扩增出了Cenexin cDNA片段,原核表达重组蛋白后,用其免疫小鼠制备了高滴度的抗Cenexin的多克隆抗体,然后利用免疫荧光染色、Western Blot和半定量RT-PCR方法,研究了大鼠精子发生过程中Cenexin蛋白和基因的表达特征。结果显示Cenexin mRNA水平在精原细胞和精母细胞中较高,随后表达水平下降,而蛋白质分子在精原细胞到精子细胞中都定位于细胞的一个中心粒上,表示有成熟中心粒的存在,在长形精子细胞中该蛋白位于鞭毛的基体部。附睾的绝大多数成熟精子中Cenexin免疫染色消失。中心体蛋白Cenexin在精子变态期的表达变化可能与精子鞭毛形成的起始有关。     

中心体蛋白Centrin家族在大鼠精子发生过程中的表达

中心体蛋白Centrin家族在大鼠精子发生过程中的表达@孙晓冬$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国北京100005 @俞作仁$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国北京100005 @李赛$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国北京100005 @马静$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国北京100005 @葛晔华$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国北京100005 @薛社普$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国北京100005 @韩代书$中国医学科学院基础医学…     

The cloning and expression characterization of the centrosome protein genes family (centrin genes) in rat testis

Centrins are members of the centrosome protein family, which is highly conserved during revolution. The homologous genes of centrin in many organisms had been cloned, but the sequences of the rat centrin genes were not reported yet in GenBank. We cloned the cDNA fragments of centrin-1, -2 and -3 from the rat testis by RT-PCR, and analyzed the homology of the deduced amino acid sequences. The expression characterization of centrin genes in rat spermatogenesis was carried out by semi-quantitative RT-PCR. The results show that the homology of the corresponding centrin proteins in human, mouse and rat is high. The expression of centrin-1 is testis-specific, spermatogenic cell-specific and developmental stage-related. Centrin-1 begins to be transcribed when the meiosis occurs, and its mRNA level reaches the peak in round spermatids. Centrin-2 and centrin-3 are highly expressed in spermatogonia and their mRNA level decreases markedly when meiosis occurs. These results suggest that centrin-1 may play roles in meiosis and spermiogenesis, and centrin-2 and centrin-3 may be related to mitosis.     

用DDRT-PCR方法克隆小鼠精子发生早期相关基因的EST

为了避免差异显示技术中的放射性污染 ,并用之于筛选、克隆精子发生早期的相关基因 ,分离纯化了小鼠的原始精原细胞及B型精原细胞 ,提取其总RNA ,逆转录获得cDNA ,以荧光差异显示方法筛选差异表达基因。利用斑点杂交技术对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性。选取 16条差异显著的片段做克隆测序 ,通过Gen Bank/Blast比较 ,有 7个片段属于新的EST ,且均表现为在B型精原细胞中表达强度高于原始精原细胞。提交Gen Bank获得注册号。从中选取较有意义的 3条基因片段通过半定量RT PCR方法进一步验证其表达特征。和传统的差异显示方法比较 ,文中所采用的mRNA差异显示技术可快速排除假阳性结果 ,避免同位素标记带来的放射性污染。结果表明所获得的 7个新EST均表现为B型精原细胞中高表达 ,这些表达升高的基因可能与其后精子发生过程中的一系列特殊现象 (如减数分裂、变态成形 )有关 ,为生精细胞的分化做物质上的准备。     

大鼠中心体蛋白家族基因的克隆及其在睾丸中的表达特征

centrin是进化上高度保守的中心体蛋白家族, 已从多种生物中克隆到其同源基因, 但基因文库中尚无大鼠centrin序列的报道. 采用RT-PCR从大鼠睾丸组织中克隆到centrin-1, -2和 -3 cDNA片段, 对其衍生的氨基酸序列进行同源性比较, 结果显示, 人、小鼠、大鼠中相应的centrin蛋白同源性很高. 采用半定量RT-PCR技术研究了它们在大鼠精子发生过程中的表达特征. 结果表明, centrin-1的表达具有睾丸组织和生精细胞特异性, 并呈现出发育阶段相关的规律, 它仅在减数分裂开始后转录, 其mRNA水平在圆形精子细胞中达到高峰. centrin-2和centrin-3在睾丸精原细胞中有高表达, 进入减数分裂后其mRNA水平迅速降低, 同时在一些体细胞中也有表达. 推测centrin-1可能在减数分裂或精子细胞变态分化过程中发挥作用, 而centrin-2, -3可能与有丝分裂有关.     

DDRT—PCR方法克隆小鼠精子发生早期相关基因的EST

为了避免差异显示技术中的放射性污染。并用之于筛选。克隆精子发生早期的相关基因。分离纯化了小鼠的原始精原细胞及B型精原细胞,提取其总RNA。逆转录获得cDNA,以荧光差异显示方法筛选差异表达基因。利用斑点杂交技术对差异片段进行快速鉴定以排除假阳性,选取16条差异显著的片段做克隆测序。通过Gen-Bank/Blast比较,有7个片段属于新的EST,且均表现为在B型精原细胞中表达强度高于原始精原细胞,提交GenBank获得注册号,从中选取较有意义的3条基因片段通过半定量RT-PCR方法进一步验证其表达特征,和传统的差异显示方法比较,文中所采用的mRNA差异显示技术可快速排除假阳性结果。避免同位素标记带来的放射性污染,结果表明所获得的7个新EST均表现为B型精原细胞中高表达,这些表达升高的基因可能与其后精子发生过程中的一系列特殊现象（如减数分裂,变态成形）有关,为生精细胞的分化做物质上的准备。     

大鼠cenexin蛋白多克隆抗体的制备及其在精子发生过程中的表达的研究

大鼠cenexin蛋白多克隆抗体的制备及其在精子发生过程中的表达的研究@孙晓冬$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国 北京100005 @李赛$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国 北京100005 @俞作仁$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国 北京100005 @马静$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国 北京100005 @葛晔华$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国 北京100005 @韩代书$中国医学科学院基础医学研究所细胞生物学系! 中国 北京100005 @薛社普$中国医学科学…