抗HPV11E2核酸的计算机设计

借助计算机软件分析,设计出能特异性切割HPV11型644nt型644ntE2mNA的核酶。遵循Symons锤头状核酶结构和GUX剪切位点原则,靶序列存在32个剪切位点,通过计算机软件分析核酶的最佳剪切位点,并对底物及核酶的二级结构进行预测及进行相应基因生物学功能和基因同源性分析,筛选出2个锤头结构核酶。针对这两位点设计的核酶分别命名为RZ277和RZ3281。计算机分析显示,两核酶与底物切点两翼碱基形成锤头状结构,切点所在基因序列具有相对松驰的二级结构,位于该基因重要生物功能区内,是核酶的理想攻击区域,通过基因库检索,在已知人类基因中排除了与上述两核酶切点两翼碱基有基因同源性序列的可能性。并非所有的GUX位点（X：C、U、A）或CUX均可作为核酶的最佳剪切切割反应,为下一步将核酶用于细胞内和体内试验打下基础。     

抗HPV11 E2核酶的计算机设计

 借助计算机软件分析 ,设计出能特异性切割HPV11型 6 4 4ntE2mRNA的核酶 (ribozyme) .遵循Symon′s锤头状核酶结构和GUX剪切位点原则 ,靶序列存在 32个这样的剪切位点 .通过计算机软件分析出核酶的最佳剪切位点 ,并对底物及核酶的二级结构进行预测及进行相应基因生物学功能和基因同源性分析 ,筛选出 2个锤头结构核酶 .针对这两位点设计的核酶分别命名为RZ2 777和RZ32 81.计算机分析显示 ,两核酶与底物切点两翼碱基形成锤头状结构 ,切点所在基因序列具有相对松弛的二级结构 ,位于该基因重要生物功能区内 ,是核酶的理想攻击区域 .通过基因库检索 ,在已知人类基因排除了与上述两核酶切点两翼碱基有基因同源性序列的可能性 .将两核酶用于体外剪切实验取得了良好的实验结果 ,认为借助计算机分析可帮助尽快从多个剪切位点选择出最适核酶     

抗HPV11／E2基因Ribozyme对靶RNA的体外剪切研究

为了寻找HPV11型引起的生死系统感染的治疗途径和探讨HPV的致病机理,本实验以HPV11病毒质粒为模板,扩增出HPV11型E2区644bp片段,采用pEGM-T-Easy Vector为载体,构建pTV-644克隆载体,经筛选得到克隆株,取质粒测序鉴定,采用上海生化所陈农安教授编制的锤头状Ribozyme设计软件进行计算机分析,选择Ribozyme对靶基因的最佳剪切位点,及进行基因同源性分析和生物学功能分析,选择出针对HPV11 E2靶基因的RZ2777,在最适条件下进行体外剪切反应,发现人工合成和体外转录得到的Ribozyme分子均能在相应位点准确切割靶RNA分子,选择合适的反应条件切割效率达60％以上,Km和Kcat值分别为0.63μmol／L、0.12μmol／L、RibozymeL两端的5′c－is－ribozyme和3′－cis－ribozyme自我剪切释放并未影响切割活性,但靶RNA侧翼序列影响了Ribozyme的剪切活性。实验研究表明,Ribozyme可能成为治疗HPV11型引起的尖锐湿疣的有效手段,并有望在分子水平上开辟出基因治疗HPV11病毒感染的另一新天地。     

Rib9ozyme在基因治疗中的研究进展

８０年代嫁妆 ，由美国科学家Ｃｅｃｈ和Ａｌｔｍａｎ发现了Ｒｉｂｏｚｙｍｅ（核酶），随着人类基因工程研究的深入，部分临床实验室工作者和基础科学研究人员开始注意到Ｒｉｂｏｚｙｍｅ在基因治疗中的应用潜力。近几年来，人们利用Ｒｉｂｏｚｙｍｅ可以特异性地切靶ＲＮＡ序列的特点，设计适合的Ｒｉｂｏｚｙｍｅ阻断特定基因的表达，相继对艾滋病、肿瘤、生殖系统疾病、肝炎、白血病、移植排斥反应等疾病进行了大量研究。试验结     

抗HPV11／E2基因Ribozyme对靶RNA的体外剪切研究

为了寻找HPV11型引起的生殖系统感染的治疗途径和探讨HPV的致病机理,本实验以HPV11病毒质粒为模板,扩增出HPVll型E2区644bp片段,采用pGEM-T-Easy Vector为载体,构建pTV-644克隆载体,经筛选得到克隆株,提取质粒测序鉴定。采用上海生化所陈农安教授编制的锤头状Ribozyme设计软件进行计算机分析,选择Ribozyme对靶基因的最佳剪切位点,及进行基因同源性分析和生物学功能分析,选择出针对HPVllE2靶基因的RZ2777,在最适条件下进行体外剪切反应,发现人工合成和体外转录得到的Ribozyme分子均能在相应位点准确切割靶RNA分子,选择合适的反应条件切割效率达到60％以上,Km和Kcat值分别为0.63μmol/L、0.12μmol/L,RibozymeL两端的5′-cis-ribozyme和3′-cis-ribozyme自我剪切释放并未影响切割活性,但靶RNA侧翼序列影响了Ribozyme的剪切活性。实验研究表明,Ribozyme可能成为治疗HPVll型引起的尖锐湿疣的有效手段,并有望在分子水平上开辟出基因治疗HPVll病毒感染的另一新天地。