用cDNA差式分析法克隆受GA抑制的豌豆基因

采用新兴的cDNA差式分析法(representational difference analysis,RDA)比较了经过赤霉素(GA)处理和未经过处理G2豌豆基因表达的差异,发现该豌豆细胞内有数个被GA特异性抑制的mRNA.克隆其中分子量较大的片段PGAS1～3(PeaGA suppressed cDNA 1～3),经Northern杂交证实这些基因只在未经GA处理的豌豆细胞内表达.比较现行核DNA(或 cDNA)减法及差式显示(Differential display)等技术,认为本方法不仅操作简单、易于推广,而且重复性好,假阳性少,是分子克隆技术的重要进步.     

Molecular cloning of GA-suppressed G2 pea genes by cDNA RDA

GA-treated and non-treated G2 pea cDNAs were compared using a newly developed method called cDNA representational difference analysis (cDNA-RDA), and several GA-suppressed mRNAs were found. After cloning of the larger fragments PGAS1-3 ( pea GA-suppressed cDNA 1-3), they were demonstrated to be expressed only in pea tissue not treated with GA3 through Northern analysis. Compared with subtractive hybridization and differ-ential display techniques, this method not only can be easily manipulated but also has a relatively low rate of false posi-tive and is highly repetitive. It is the major progress in molecular cloning techniques.     

骨桥蛋白调控上皮间质转化的研究进展

上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质细胞表型的生物学过程,被认为是器官纤维化及上皮源性恶性肿瘤发生与转移的启动环节。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)为一种表达于体内多种组织及细胞的基质蛋白,目前研究显示OPN参与了组织器官的纤维化、上皮源性恶性肿瘤发生及转移,其作用的分子生物学基础可能与EMT相关。在此本文将对参与OPN调控EMT的相关信号途径进行简述,以期为临床通过调控OPN的表达或含量,改善组织器官纤维化,降低上皮源性恶性肿瘤转移及侵袭力提供分子生物学依据。     

内质网应激分子GRP78 对非小细胞肺癌的诊断价值研究

目的:探讨内质网应激分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值。方法:收集45例NSCLC患者术后癌组织标本,及其18例癌旁组织,采用实时定量PCR法检测所有组织中GRP78的表达情况,分析NSCLC癌组织中GRP78的表达与患者临床特征的关系,及其对患者生存期的影响。结果:NSCLC组织中GRP78高表达率明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。而Ⅲa期NSCLC患者癌组织中GRP78的表达水平明显高于Ⅰ-Ⅱ期,两者存在显著性的差异(P0.05)。Kaplan-Meier分析显示,GRP78高表达的患者其生存期明显低于GRP78低表达的患者(P0.05)。结论:NSCLC患者GRP78的表达可能与肿瘤细胞的发生、发展及患者的生存期有关,可作为一个预测NSCLC患者诊断及治疗的重要的分子标志物。     

参一胶囊对晚期NSCLC 维持治疗的临床研究

目的:探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者化疗获益后采用参一胶囊维持治疗的临床疗效。方法:选择2010年11月到2014年11月在我院经一线化疗后疗效评价无病情进展的120例晚期NSCLC患者,随机分为对照组(n=60)和实验组(n=60)。对照组仅接受定期随访观察,实验组采用参一胶囊维持治疗,比较两组患者治疗后的临床疗效、治疗前后免疫功能、生活质量的变化及不良反应的发生情况。结果:实验组患者的疾病控制率(DCR)明显高于对照组(P0.05)。治疗后,两组患者各免疫功能检测指标均低于治疗前,且实验组明显大于对照组(P0.05)。治疗后,实验组KPS评分提高率明显高于对照组(P0.05)。整个维持治疗过程中无治疗相关性死亡。结论:晚期NSCLC患者在化疗后采用参一胶囊维持治疗,可显著提高患者免疫功能、改善生活质量,且安全性良好,疗效显著,值得在临床上推广应用。     

石油降解酶的筛选、固定化及添加表面活性剂强化其对石油的降解

在石油开采和加工过程中产生的含油污泥是石油化工行业中主要的污染源,会对周边生态环境造成持续性的危害。生物法降解被认为是一种有效且可持续的技术而备受关注。目前的研究多聚焦在微生物法降解石油,而酶法降解鲜有报道。【目的】本研究旨在优选石油高效降解酶,并深入分析其降解特性,以期构建一套酶法降解石油的体系。【方法】基于分子对接模拟技术,分析酶与石油类常见底物的结合可能性及结合模式,通过石油降解实验优选降解酶;通过添加表面活性剂及酶固定化进一步提高酶对石油的降解效果。【结果】利用分子对接模拟及实验验证获得5种具有石油降解能力的生物酶,其中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)来源的漆酶BsLac对石油的降解率最高,72 h可降解34.1%的石油;进一步研究发现,表面活性剂的添加均可促进BsLac对石油的降解,其中槐糖脂的促进作用尤为显著。当槐糖脂终浓度为1 000 mg/L时,石油的降解率最高,为46.3%;然而,2,2''-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐的添加对BsLac降解石油的促进作用并不明显;固定化结果表明,以花生壳为吸附载体固定化的BsLac对石油的降解率最高,为56.3%。【结论】本研究基于分子对接模拟和实验筛选获得了石油降解酶BsLac,固定化的BsLac可实现石油的高效降解,为生物酶法降解石油的进一步探索奠定了实验和理论基础。     

吸入伊洛前列素对非小细胞肺癌细胞化疗敏感性的影响

目的:研究吸入伊洛前列素对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞化疗敏感性的影响。方法:研究对象为2014年8月至2015年8月在我院住院治疗的40例NSCLC患者,随机分为治疗组和对照组。所有患者均予以吉西他滨联合顺铂化疗,治疗组在化疗同时予以吸入伊洛前列素。ELISA检测患者治疗前后患者血清中HIF-1α和VEGF表达水平的变化,采用Karnofsky评分评价患者功能状况,并对比两组疗效及毒副反应。结果:治疗组有效率(RR)和控制率(CDR)显著高于对照组(P0.05);治疗组Karnofsky评分改善率优于对照组(P0.05);治疗组毒副反应发生率低于对照组(P0.05);治疗后两组血清中HIF-1α和VEGF的表达水平均低于治疗前,治疗组治疗后1天、21天血清中HIF-1α和VEGF的表达水平显著低于对照组同期,且治疗后21天表达水平显著低于治疗后1天(P0.05)。结论:吸入伊洛前列素能通过调节HIF-1α和VEGF水平改善NSCLC细胞化疗敏感性,且疗效安全显著,预后好。     

波形蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探究波形蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与肺癌浸润转移的相关性。方法:收集2012年6月-2014年6月我院手术切除的NSCLC癌组织标本150例及癌旁正常组织(距肿瘤5 cm)79例,提取两组的RNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测波形蛋白m RNA表达水平,免疫组化法检测波形蛋白的蛋白表达,分析波形蛋白表达水平与淋巴结转移、TNM分期的相关性。结果:波形蛋白m RNA在NSCLC癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P0.05)。NSCLC癌组织中波形蛋白m RNA表达水平的上调与淋巴结转移及TNM分期(P0.05)相关。结论:波形蛋白在NSCLC患者中表达异常升高,与NSCLC的发生和浸润转移密切相关。     

共刺激因子B7-H3 在非小细胞肺癌中的表达研究

目的:探讨共刺激椅子B7-H3在人不同非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系和组织中的表达及其临床意义。方法:实时定量反转录-聚合酶链式反应及蛋白印迹法检测B7-H3在5种人NSCLC细胞系中的表达量,利用免疫组化法检测121例NSCLC、33例癌旁组织及36例良性病变组织中B7-H3的表达量,并收集患者临床资料,分析B7-H3与临床参数的关系。结果:5个NSCLC细胞系中均见B7-H3的表达,A549及SPAC-1中表达较H466、H1299及H460中表达较低;B7-H3在NSCLC组织中高于癌旁组织及良性病变组织(P0.001);分化程度高者平均IOD高于分化程度中、低的患者(P0.05)。发生淋巴结转移和未发生淋巴结转移的患者B7-H3的平均IOD之间存在显著性差异(P0.05)。结论:B7-H3在NSCLC组织中高表达,可能是疾病治疗或诊断的靶因子。