骨形成蛋白4条件性RNA干扰小鼠的建立

为研究骨形成蛋白4(Bone morphogenetic protein 4, BMP4)在骨骼发育中的作用, 我们以含有LoxPneo的pBSK/U6载体为骨架, 构建小鼠BMP4条件性RNAi(conditional RNA interference), CRNA; 载体(BMP4CRNAi), 经KpnⅠ和AflⅢ双酶切获取针对bmp4并含neo基因的目的干扰片段, 纯化后的目的片段显微注射入0.5 d的FVB/NJ小鼠受精卵, 并植入同期发情的假孕母鼠中, 获取G0代转基因小鼠; 利用PCR对G0代转基因小鼠基因型进行鉴定, PCR阳性的小鼠与FVB/NJ小鼠交配, 最终获取稳定传代的BMP4CRNAi小鼠。稳定传代的BMP4^CRNAi小鼠与成骨和软骨前体细胞表达Cre的转基因小鼠(Col2a1-Cre)交配, 获取BMP4^Col2a1-CRNAi小鼠。分离BMP4Col2a1-CRNAi小鼠原代软骨细胞, 提取总RNA, 利用半定量RT-PCR检测RNA干扰效率。小鼠基因型鉴定结果表明：成功获得条件性RNAi转基因小鼠; BMP4干扰效率检测结果表明：在软骨细胞中BMP4的干扰效率为81％。以上结果表明, 我们成功制备了BMP4^CRNAi小鼠和BMP4^Col2a1-CRNAi小鼠, BMP4^CRNAi小鼠与不同Cre转基因小鼠交配, 可以研究BMP4在不同细胞、组织和器官的功能, BMP4^Col2a1-CRNAi小鼠的获得为研究BMP4在软骨发育中的作用提供了合适的动物模型。