λDNA限制片段上的基因在大肠杆菌中表达

我们用EcoR1及BamH1两种限制性核酸内切酶来酶解质环pBR322成为pB-R322C(375bp)及pBR322B(3987bp),并酶解λcI857S_7DNA 的EcoR1限制片段λF_2(λDNA 的65.5—81%片段)成为λF_2A(λDNA 的65.6—71.3%片段,2679bp)及λF_2B(λDNA 的71.3—81%片段,4559bp)。再用T_4-DNA 连接酶将pBR322B 及λF_2B重组成为一个新质环,叫做pCB_2,其上具有cI 基因,cro 基因及启动基因,这是从随机挑取的338个菌落的第48号菌所携带的新质环。pCB_2的性质是:1.它赋予转化子以单抗药性(Ap~r),2.它赋予转化子对λcI857S_7感染的免疫性,由此可见,我们接上去的λ启动基因在发挥作用,cI 基因或/和cro 基因得以表达。第48号菌经过42℃处理后,其免疫能力仍不低于处理前的。3.经EcoR1或BamH1一种酶水解后,用电镜及凝胶电泳检查,测得pCB_2的分子长度为2.66±0.33μm,分子量为5.51±0.68×10~6d(计算值为5.41×10~6d,8546bp)。4.经过EcoR1及BamH1二种酶水解后,分解为二种分子,一大一小。在凝胶电泳中,其分子量大的与λF_2B 相当,小的与pBR322B 相当。5.pCB_2具有生物活性,其转化频率为2.1×10~6CFU/μgDNA。6.用λF_2与经历EcoR1切割成线状的pCB_2在一起进行变性后复性,在电镜下观察异源双链图形,其长度与建造时的设计相符。从以上结果我们得出的结论是:我们建造的PCB_2是一个新质环,其中的CI 基因及/或cro 基因,能在λ启动基因指导下,在大肠杆菌中表达。     

酵母质粒的结构,功能及其基因表达 Ⅰ.从单倍体酵母菌株7209-1A(saccharo myceS cerevisiae)中纯化的质粒及其鉴定

单倍体酵母菌株7209-1A(Saccharo-myces cerevisiae)中,含有2微米长的质粒,使用改进的抽提方法能快速简便制备酵母总DNA,用酸酚法或电泳割胶后经玻璃粉吸附法代替氯化铯-溴乙锭密度梯度超离心制备纯的酵母质粒,经电泳、电镜鉴定,该质粒为2.1±0.1微米长,存在两个不相连的反向重复顺序,电镜观察到哑铃状结构,其柄长为0.2±0.03微米,大环约2800bp,小环约2400bp,限制酶Pstl只有一个切点,而EcoRl酶的切点与A364A的完全不同。     

重组DNA技术

重组DNA(recombihant DNA),顾名思义,即将两种不同的DNA分子,经过裁剪并重新组合,创造出一种新的、杂合的DNA分子,然后将它转化或转导至受体细胞并在其中进行复制以及表达。这一技术通常叫作基因工程,广义来讲也称为遗传工程。1972年,美国生物化学家P.Berg等人首先将XDNA上剪切下来的一段基因,成功地拼接到SV_(40)病毒DNA分子上,从而开创了这一崭新的技术。随后,这一技术在现代生物学的研究和     

用两相法纯化具有生物活性的质环

质环(Plasmid)是遗传工程实验中重要的载体之一。国外纯化质环大多数采用超离心技术。因此,质环的制备在国内受到很大的限制。本文介绍利用葡聚糖,聚乙二醇和磷酸钠缓冲液所组成的二相系统可以纯化具有生物活性的质环。在获得总核酸(包括 RNA,DNA)溶液后,只要借助于台式离心机便可纯化质环。方法可靠、简便和省时。产品纯度较高,生物活性好,质环的转化频率每微克可高达4×10~8个细胞。本文还检查了无机磷对转化的影响。本文承匡达人教授审阅,特此致谢。     

重组DNA技术(续)

四、DNA的体外重组 DNA重组技术,当用于干扰素、胰岛素、疫苗、免疫球蛋白等物质的生产时,目前多半采用从mRNA反转录成cDNA,然后和载体DNA重组,再转化至大肠杆菌内进行复制和表达。在某一基因结构已清楚的情况下,亦可人工合成该基因(如人胰岛素基因等),再将该基因嵌入载体引进大肠杆菌中。若从基因库中分离出的基因,由于已含有内含子(Intron),