从大肠杆菌中表达、纯化宁乡猪N-乙酰谷氨酸合成酶并制备其多克隆抗体

N-乙酰谷氨酸合成酶催化生成的N-乙酰谷氨酸(NAGS)对于哺乳动物尿素循环第一个酶—氨基甲酰磷酸合成酶I变象异构激活是必需的。N-乙酰谷氨酸合成酶定位于肝脏和小肠线粒体基质中,通过提供N-乙酰谷氨酸调节氨基甲酰磷酸合成酶I的活性来调节尿素合成。我们用RT-PCR方法从宁乡猪肝脏中扩增了N-乙酰谷氨酸合成酶的开发阅读框,并将此基因连接到原核表达载体上,构建了pET-NAGS质粒。将重组质粒转化到Ec.oliBL21(DE3),在IPTG诱导下表达His-NAGS融合蛋白。通过SDS-PAGE,得出NAGS分子量约为40kDa。一步亲和层析纯化后,我们将纯化后的NAGS蛋白注射到新西兰大白兔中制备多克隆抗体。通过免疫组化和免疫印迹测试抗体,结果表明此抗体有较好的抗原性和特异性。据我们所知,这是第一次在大肠杆菌中表达来源于宁乡猪的NAGS。     

中草药超微粉对断奶仔猪氨基酸消化吸收的影响

为了研究中草药超微粉对断奶仔猪氨基酸消化吸收的影响,将60头21日龄断奶仔猪随机分为3组,分别为添加中草药超微粉日粮组、粘杆菌素日粮组及基础日粮组.于添加后第7、14和28 d每组随机取5头试猪,前腔静脉采血,测定血清游离氨基酸含量;采血试猪经麻醉后处死,取回肠末端食糜测定其中的氨基酸含量.结果表明,中草药超微粉组的血清总氨基酸含量在第14和28 d显著高于基础日粮组,回肠末端食糜氨基酸含量在第28 d显著低于基础日粮组和粘杆菌素日粮组,故认为中草药超微粉能显著促进蛋白质在胃肠道的消化,且能显著增加氨基酸在肠道的吸收.