青蛤Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆及其在组织间的表达分析

利用构建的SMART-cDNA文库及高通量测序方法,获得了青蛤Kazal家族丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Serine Protease Inhibitor,SPI)的全长序列,采用荧光定量PCR方法分析了SPI在青蛤各组织的表达情况,并在鳗弧菌胁迫下分析了SPI在青蛤血液中的时序表达关系。结果表明,青蛤SPI基因全长587 bp,CDS为67~520 bp,编码151个氨基酸,具有19个氨基酸的信号肽序列;荧光定量PCR结果显示,该基因在血液、肝脏、外套膜、鳃和闭壳肌等组织中表达差异明显,其中血液中表达水平最高,在闭壳肌中表达水平较低,其他组织表达量极少;在鳗弧菌刺激后3 h和48 h青蛤血液中SPI的表达量出现明显上调的趋势且与对照组有极显著性差异(P0.01),说明SPI基因在青蛤的免疫反应中具有重要的作用。