两株blaNDM-5基因介导的碳青霉烯耐药禽源大肠杆菌ST10和ST354耐药性

【背景】近年来,对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆科细菌的出现对公众的健康构成了严重的威胁。【目的】为了解家禽养殖中肠道菌对碳青霉烯类抗生素耐药情况,对陕西西安和浙江海宁两地的鸡和鸭养殖场粪便进行耐药菌筛选并分析。【方法】在含美罗培南的LB琼脂平板上筛选可疑菌落并利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)鉴定。通过微量肉汤稀释法进行最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)测定。通过Illumina HiSeq平台进行全基因组测序。使用Res Finder数据库预测获得性耐药基因。利用S1酶切后脉冲场电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)和Southern blot杂交进行质粒和碳青霉烯类耐药基因的确认。【结果】分离出两株碳青霉烯类耐药的大肠杆菌HN1-26和XN3-1,均对头孢他啶、头孢噻呋、氨苄西林、奥格门丁、复方新诺明、磺胺异恶唑、恩诺沙星、氧氟沙星、美罗培南、四环素耐药。此外,XN3-1对氟苯尼考和大观霉素耐药。菌株HN1-26和XN3-1的多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)分别为ST354和ST10。两株菌对美罗培南的MIC值均为64μg/m L,但是在含美罗培南的LB平板上,菌株HN1-26比菌株XN3-1生长得更快。两株菌都存在携带bla_(NDM-5)基因的Inc X3型质粒。两个质粒的序列完全一致,大小为46 161 bp,包含接合转移元件,能够以大肠杆菌作为受体细胞进行转移。【结论】Inc X3型质粒是转移bla_(NDM-5)基因的重要载体,在我国畜禽养殖中具有扩散风险。