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目的 本研究拟建立一种灵敏快速的实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)方法,用于检测大、小鼠木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus,S.xylosus)。方法 本研究选择特异性gehM基因片段作为靶标合成了一套引物,建立了木糖葡萄球菌检测的qPCR方法。对木糖葡萄球菌标准菌株和其他非目标菌进行特异性分析。将木糖葡萄球菌的DNA进行10倍稀释测定其灵敏度。用送检的样本进行了临床应用并测序验证,同时与培养法进行比较。结果 仅木糖葡萄球菌出现特异性扩增曲线,而其他非目标菌未出现,表明设计的引物对木糖葡萄球菌具有特异性,灵敏度为100 fg/μL,组内和组间重复性均小于3%。共检测60份临床样品,有5份样品扩增曲线为典型的S曲线,将该qPCR产物克隆测序并进行同源性比对,该序列与木糖葡萄球菌的同源性为99.63%,表明该样本木糖葡萄球菌核酸阳性,所检测样本阳性率为8.3%,而培养法的阳性率为6.7%,qPCR方法阳性检出率比培养法略高。结论 建立的木糖葡萄球菌qPCR方法,具有快速、灵敏度高、特异性强和重复性好的优点,可用于实... 相似文献
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肌肉生长抑制素(myostatin, 简称抑肌素, 又称GDF8)是骨骼肌发育的负调节因子. 本研究对猪抑肌素基因5′调控区的序列进行了克隆, 对该区段的多态性及其与大白猪初生重和早期生长的关系进行了分析. 结果表明, 猪抑肌素基因5′调控区的序列存在长度多态性和单核苷酸多态性(SNP), 其中, 在435和447位点, 由PCR-SSCP判定的2个等位基因(A和B)核苷酸序列不同: A等位基因分别为A和G, B等位基因则分别为G和A. 在所检测的大白猪群体中A和B等位基因的频率分别为0.525和0.475; 所检测的9头莱芜猪中4头为AA型, 5头为AB型, 未检测到BB型. 本研究首次发现等位基因B对大白猪21日龄(P<0.01)、28日龄(P<0.05)和70日龄体重(P<0.05)以及0~21日龄(P<0.01)、0~28日龄(P<0.05)和21~70日龄(P<0.01)的日增重等早期生长性状均具有有利效应, 加性效应值分别为(0.596±0.205)(P=0.0041), (0.498±0.200)(P=0.0136)和(1.409±0.551) kg (P=0.0112)以及(28.39±9.74)(P=0.0041), (17.78±7.15)(P=0.0136)和(37.00±16.92)g (P=0.0304), 均达到显著或极显著水平. 而对28~70日龄的日增重, 尽管BB基因型个体有较高的日增重, 但差异不显著(P>0.1). 相似文献
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