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目的:建立适合桔梗的比较稳定的SRAP反应体系,用于桔梗遗传多样性分析。方法:用改进的CTAB法提取桔梗叶片的总DNA,通过对不同镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA含量、引物浓度、DNA聚合酶量条件下的SRAP扩增反应的效果。结果:桔梗SRAP扩增反应的最佳体系:模板DNA 20ng,引物0.8μmol/L,dNTP150μmol/L,MgCl22.0mmol/L,TaqDNA聚合酶1unit,10×Buffer2.0μL;反应程序为94℃预变性5min;94℃变性1min,35℃退火1min,72℃延伸1min,5个循环;94℃变性1min,50℃退火1min,72℃延伸1min,35个循环;最后72℃延伸5min,4℃保存。结论:按此优化的SRAP条件进行实验,重现性良好,可用于桔梗遗传多样性分析。 相似文献
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