东方蝼蛄肠道菌分离鉴定及产纤维素酶菌株的筛选与酶活力测定

【背景】 蝼蛄(Gryllotalpaspp.)是我国分布广泛的农业地下害虫,其肠道菌的组成及功能菌资源的挖掘都有待研究。【目的】 获得蝼蛄肠道可培养菌株,对其进行鉴定和产纤维素酶功能菌株的筛选,并检测其酶活性,对活性较高菌株的产酶条件进行探究。【方法】 采用传统的微生物分离培养方法,结合分子生物学技术对东方蝼蛄肠道菌进行分离和鉴定,采用羧甲基纤维素钠(carboxymethylcellulose sodium, CMC-Na)水解圈法筛选产纤维素酶菌株,并用3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid, DNS)法测定纤维素酶活力。【结果】 从东方蝼蛄肠道共分离出23个菌株,可归为7属10种：其中芽孢杆菌属(Bacillus) 4种,肠球菌属(Enterococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、不动杆菌属(Acinetobacter)、变形杆菌属(Proteus)、肠杆菌属(Enterobacter)和乳球菌属(Lactococcus)各1种。结果显示,除菌株N18外的其余22个菌株均具有产纤维素酶能力,其中菌株N3和N14产酶能力最强,其次是N15和N21。培养基的pH、培养时间、菌液接种量对菌株的产酶能力影响各异。在实验设定的梯度范围内,所测各单因素影响下,均为菌株N3和N14产酶能力最强。【结论】 蝼蛄肠道可培养菌资源丰富,获得菌株中高达95%具有产纤维素酶的功能,其中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) N3和N14产酶能力最强,最具开发潜力。     

p53上调凋亡调制物的促凋亡作用

p53上调凋亡调制物(p53up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)是Bcl-2家族中BH3-only(Bcl-2 homology 3-only)蛋白质家族成员,通过其BH3结构域与所有的Bcl-2抗凋亡蛋白质结合,引发线粒体功能障碍和胱天蛋白酶(caspase)级联反应,诱导细胞凋亡。PUMA被证实在多种病理性应激介导的细胞凋亡中发挥着至关重要的作用,因而成为近年研究的热点。     

大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

为探讨p53上调凋亡调制物(p53 up-regulated modulator of apoptosis, PUMA)在大鼠心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenatio, H/R）损伤中的作用,本 研究将靶向PUMA的siRNA（si-PUMA）转染大鼠心肌细胞以建立PUMA沉默表达模型,观察其对心肌细胞H/R损伤的影响.RT-PCR和Western印迹结果表明,最适转染浓度50 nmol/L si-PUMA能靶向抑制H/R损伤心肌细胞的PUMA表达;MTT法检测心肌细胞存活率及培养基乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）活性测定结果发现,si-PUMA 组细胞存活率较H/R 6 h模型组明显提高,培养液中LDH活性显著降低（P<0.01）;分光光度法及Annexin V-FITC/PI联合染色流式细胞凋亡检测结果显示,si-PUMA组caspase-3活性较H/R 6h组明显下调,细胞凋亡率明显降低（P <0.01）;RT-PCR结果 提示,与H/R 6 h组相比,si-PUMA组Bax及Bcl-2表达分别出现显著下调及上调（P <0.05）.以上结果表明,靶向PUMA的siRNA转染能明显增强心肌细胞耐受H/R损伤的能力,对心肌细胞具有较好的保护作用;PUMA介导H/R诱导的心肌细胞凋亡,是心肌缺血/再灌注损伤基因治疗的一个潜在靶点.     

黄颡鱼重组生长激素的制备及对其鱼苗生长的影响

生长激素在渔业生产中具有重要的应用价值, 通过制备黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)同源重组生长激素并用于促生长实验, 从而为建立鱼苗快速培育方法提供理论依据。根据已知黄颡鱼生长激素(PfGH)基因cDNA序列, 利用IPTG诱导和SDS-PAGE分析方法, Western印迹表明在IPTG终浓度1.0 mmol/L、温度17℃和培养时间14h的条件下, 黄颡鱼生长激素基因在大肠杆菌中大量表达, 获得重组生长激素蛋白。然后, 随机选取黄颡鱼分为4组放入室内水族箱中进行养殖, 每箱35尾, 体质量为(0.850.01) g, 每组设3个平行, 水体循环净化。用制备的重组生长激素浓度分别为0、1、5和10 mg/L对黄颡鱼进行浸泡处理, 每周一次, 0为对照组。在养殖4周后, 对各组增重率和特定生长率进行比较, 结果表明1 mg/L组增重率和特定生长率分别比对照组提高了29.67% (P0.05)和11.90% (P0.05), 5 mg/L组增重率和特定生长率分别比对照组提高了21.32% (P0.05)和8.83% (P0.05), 各组间体成分等均无明显差异。停用生长激素4周后, 各组黄颡鱼的生长性能、体成分等均无显著差异。研究表明通过原核表达可以获得黄颡鱼重组生长激素, 用于促进鱼苗生长培育的最佳浸泡浓度为1 mg/L。     

细胞自噬与凋亡的交互作用

细胞自唾又称Ⅱ型程序性细胞死亡,参与了多种疾病的发生和发展。自唆与凋亡之间存在着复杂的交互调控——二者能被多种应激刺激共同激活、共享多个调节分子,甚至互相协调转化等。全面深入研究自噬与凋亡之间的交互作用机制,将为肿瘤等疾病的认知及治疗带来突破性进展。     

乌贼皮胶原蛋白特性与抗氧化能力研究

为提高乌贼综合利用率,采用乌贼皮为主要原料,对胃蛋白酶和酒石酸复合提取胶原蛋白的特性与抗氧化性进行综合研究。研究表明:所提取的乌贼皮胶原蛋白溶解性受pH和Na Cl浓度影响显著,pH为5时溶解度最小,降低46%;Na Cl浓度由0 mol/L增至1.2 mol/L,溶解度逐渐降低80%。黏度受样品浓度、pH、离子强度、贮存时间影响明显,随着样品浓度的增高,黏度逐渐增大;同一浓度,在pH3处黏度取得最大值;随着Na Cl浓度的增高,黏度逐渐降低;贮存24 h~48 h,黏度保持最大。抗氧化能力随胶原样品浓度的增加呈上升趋势,DPPH清除率在5 mg/m L时达到最大值49.66%;样品浓度大于10 mg/m L后,还原能力明显增加;胶原样品浓度10 mg/m L时·OH清除率达到最大为95.66%。实验为乌贼皮胶原蛋白的开发利用提供了理论基础。     

靶向PUMA的siRNA对缺氧/复氧诱导大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

为探讨p53上调凋亡调制物(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)在大鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenatio,H/R)损伤中的作用,本研究将靶向PUMA的siRNA(si-PUMA)转染大鼠心肌细胞以建立PUMA沉默表达模型,观察其对心肌细胞H/R损伤的影响.RT-PCR和Western印迹结果表明,最适转染浓度50 nmol/L si-PUMA能靶向抑制H/R损伤心肌细胞的PUMA表达;MTT法检测心肌细胞存活率及培养基乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性测定结果发现,si-PUMA组细胞存活率较H/R 6 h模型组明显提高,培养液中LDH活性显著降低(P<0.01);分光光度法及Annexin V-FITC/PI联合染色流式细胞凋亡检测结果显示,si-PUMA组caspase-3活性较H/R 6h组明显下调,细胞凋亡率明显降低(P<0.01);RT-PCR结果提示,与H/R6 h组相比,si-PUMA组Bax及Bcl-2表达分别出现显著下调及上调(P<0.05).以上结果表明,靶向PUMA的siRN...