草木樨状黄芪变异系中甲硫氨酸代谢相关cDNA的分子克隆及其在大肠杆菌中的表达

利用mRNA差异显示技术(differential display)从草木樨状黄芪耐甲硫氨酸变异系中分离到一差异cDNA片段,命名为tm03(360bp)。mRNA杂交结果显示,该片段只在变异苗中表达,初步确定其与甲硫氨酸代谢相关。测序后在Genebank搜寻,未发现有同源序列。进一步分析表明,该cDNA克隆可编码完整的蛋白。在该基因片段两端分别合成含HindⅡ和BamH Ⅰ酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到pRSET A表达载体,转化宿主菌JMl09(DE3),经IPTG诱导表达了N′端含6个组氨酸的蛋白质,分子量约为14kD,为进一步研究该蛋白的结构和生物学功能奠定基础。     

实时荧光定量PCR快速鉴别新型冠状病毒主要变异株北大核心CSCD

为建立一种快速鉴别严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的5种主要变异株的Taq Man探针实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)体系,基于SARS-CoV-2野生型及变异株alpha (N501Y、HV69-70del)、beta (E484K、K417N)、gamma (K417T、V1176F)、delta (L452R、T478K)和omicron (H655Y、N679K、P681H)序列设计特异性引物、探针,建立和优化一种鉴别新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 5种主要变异株的Taq Man探针RT-qPCR方法,并进行该方法的特异性、敏感性、鉴别能力评价。该方法可准确区分出SARS-CoV-2野生型和突变型,与其他呼吸道病原体(n=21)无交叉,显示高特异性。该方法最低检测限为2×10;拷贝/mL,操作简单、快速、成本廉价,可用于监测SARS-CoV-2毒株的变异,精准指导疫情识别与防控。     

TRPV1 研究的新亮点：TRPV1 剪接变体

TRPV1是一种非选择性阳离子通道蛋白,可被伤害性热刺激、辣椒素和氢离子等所激活。由于TRPV1在痛觉传导(尤其是炎症情况下的痛觉传导)中起重要作用,所以TRPV1的研究对临床治疗有十分重要的意义,研究也越来越深入。因为TRPV1可被多种刺激所激活,人们推论其有多个剪接变体(splice variant),不久,即证实了此设想。本文对迄今为止发现的TRPV1剪接变体做一简单综述。     

综述与专论: 针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2变异株Omicron的疫苗研究进展

2021年底,严重急性呼吸综合征冠状病毒2 Omicron变异株迅速取代Delta突变株在世界范围内广泛流行,其S蛋白具有36个位点突变,导致致病力和传播力发生明显变化,并且具备了免疫逃逸的能力。疫苗接种是目前疫情防控最普适的手段,研究发现,现有疫苗针对Omicron突变株的保护效果明显下降。新的免疫策略或特异性疫苗/多价疫苗针对Omicron有效性的评估均需要动物模型的支撑。在实验室条件下,利用动物模型进行活病毒攻击实验,是在体内验证保护性中和抗体、疫苗有效性的关键技术手段,本文将从动物模型方向综述国内外针对Omicron变异株的疫苗研究进展。     

稻瘟病菌变异菌株的AFLP分析

利用94对AFLP引物对3个起始菌株和9个致病性变异菌株进行分析,其中49对引物可以区别出不同菌株类型,辨别变异菌株与其起始菌株的关系,以及起始菌株间的亲缘关系。9个变异菌株中5个菌株的条带数减少1~3条,4个菌株条带数没有明显变化。结果还表明,致病性及其他特征变异似乎与条带数缺失多少相关联。     

利用组织培养选择烟草耐盐愈伤组织变异体并分化出再生植株

烟草(品种革新一号)叶片为外植体,直接置入含0.5%NaCl的修改MS培养基中,诱发产生耐盐的愈伤组织。然后采取逐步提高NaCl浓度的措施,分别获得耐0.5%、1.0%、1.5%及2.0%NaCl细胞系。耐盐细胞系在无盐条件下,生长9—11代后仍保持其耐盐性。从各个耐盐细胞系均分别获得再生苗。耐2.0%NaCl的04—9细胞系共得到15株再生植株,叶片狭长、多锯齿、并具有较多的花茎,多数花粉粒畸形,经过人工授粉获得少量种子。04-9变异型再生植株水培于含有1.0—2.0%NaCl的Hogland溶液中生长85天,仍然存活。原始型愈伤组织的细胞呈不规则椭圆形,耐盐细胞系的细胞均近似圆形;耐盐浓度愈高则细胞愈小。耐盐细胞系愈伤组织的叶绿素含量随耐盐浓度增高而增加;渗透势则随耐盐水平提高而降低。耐2.0%NaCl细胞系04—9愈伤组织内脯氨酸含量高40.7倍,其再生植株叶片内的脯氨酸含量亦较原始型增加两倍。耐2.0%NaCl细胞系再生植株的幼年与成年叶片的过氧化物同工酶的酶谱与原始型均有显著差别。以上试验结果均说明耐2.0%NaCl细胞系04—9及其再生植株是一个耐盐变异体。     

Isolation of a Loma salmonae variant: biological characteristics and host range

A Salvelinus -infecting variant of Loma salmonae , derived from naturally-infected Chinook salmon Oncorhynchus tshawytscha by serial passage through brook trout Salvelinus fontinalis , has been isolated and amplified. Loma salmonae SV ( Salvelinus -variant) has a high preference for species of Salvelinus (brook trout and Arctic charr S. alpinus ) and low virulence and preference for species of Oncorhynchus (rainbow trout O. mykiss , Chinook salmon, cohoSalmon O. kisutch ) or Salmo (Atlantic salmon Salmo salar ). Although this variant of L. salmonae was different from the original, the differences do not justify describing it as a new species, although definitive determination is pending.     

Variation in alpha-L-fucosidase properties among 28 inbred mouse strains: Six strains have high enzyme activity and heat-stabile enzyme with a variant pH-activity curve; twenty-two strains have low activity and heat-labile enzyme

Alpha-L-fucosidase in tissues of 28 inbred mouse strains varied with respect to three properties: high or low heat stability, a pH-activity curve with high or low relative activity at pH 2.8, and high or low activity. Alpha-L-fucosidase from six strains (A/J, BDP/J, LP/J, P/J, SEA/GNJ, and 129/J) had high heat stability, high pH 2.8 relative activity, and high activity, whereas the other 22 strains all had low heat stability, low pH 2.8 relative activity, and low activity. The heat-stability difference was seen in all organs tested (brain, liver, kidney, spleen, heart, skeletal muscle, lung, and testis) for two heat-stabile strains (P/J and 129/J) and four heat-labile strains (C57 BL/6J, C3H/HeJ, DBA/2J, and BALB/cJ) studied in detail. The findings suggested that two structural variants of alpha-L-fucosidase, probably genetically determined, exist in these 28 inbred mouse strains, although the presence of linkage disequilibrium between alleles of tightly linked structural and regulatory genes could not be excluded.This work was supported by grants from the National Institutes of Health (NS-15281 and NS-11766), the Muscular Dystrophy Association (H. Houston Merritt Clinical Center for Muscular Dystrophy and Related Diseases), the March of Dimes Birth Defects Foundation, and a generous gift from the Alexander Rapaport Foundation.     

华南兔组织乳酸脱氢酶同工酶的研究

本文以聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析华南兔(Lepus sinensis sinensis)11种组织乳酸脱氢酶同工酶的分布待征。分析结果:骨骼肌和肝组织5条同工酶带俱全;脑、肺、卵巢和盲肠等组织各含有4条谱带(LDH-1,-2,-3和-4);胃和肾组织含有3条谱带(LDH-1,-2,和-3);眼晶状体和睾丸组织也含有3条谱带,但前者是LDH-3,-4和-5,后者是LDH-1,-2和-5;谱带最少的是心肌组织,只有2条(LDH-1和-2)。此外,还对各组织中的亚基活性分布及电泳图谱特征进行了分析。     

应用TDI-FP技术分析宫颈癌组织HPV16 E7基因A647G点突变

模板指导的末端碱基掺入反应结合荧光偏振检测技术(template direct dye-terminator incorporation with fluorescence- polarization,TDI-FP) 是SNP检测新技术. 应用TDI-FP方法分析中国陕西HPV16阳性宫颈组织HPV16 E7基因第647位核苷酸A→G热点突变(即A647G),首先在HPV16阳性的91例宫颈癌及49例正常/宫颈炎妇女宫颈DNA标本中,PCR扩增含647位点在内的HPV16 E7部分基因, 然后将紧邻647位点5′端的寡核苷酸探针与PCR产物内的模板杂交,并延伸一个与647位点碱基互补的荧光标记碱基：TAMRA-ddTTP或R110-ddCTP. 用荧光偏振仪读取荧光偏振 (FP) 值,根据升高的相应FP值判断647位点碱基. 结果表明,宫颈组织HPV16 E7 A647G的总体检出率为35.71% (50/140). 宫颈癌组的A→G突变率为42.86% (39/91),显著高于正常/宫颈炎组22.45% (11/49) 的突变率 (x2 = 5.778, P = 0.016),两组间的OR值为2.59 (95% CI = 1.17~5.71). 提示TDI-FP 可用于HPV有意义点突变的分析;我国陕西地区妇女HPV 16 A647G突变率及其对宫颈癌的警示性与其他地区相比有明显差异,该地区携带此突变病毒株的妇女患宫颈癌的风险可能较高