枸杞多糖对H5N1流感全病毒灭活疫苗的体液免疫增强作用

探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)作为佐剂对H5亚型流感病毒全病毒灭活疫苗的体液免疫增强效果。将流感病毒A/Vietnam/1194/2004(H5N1)灭活疫苗与不同剂量的枸杞多糖混合后以腹腔注射的方式共同免疫小鼠,免疫后三周收集血清用于特异性抗体检测。实验中设立氢氧化铝佐剂组作对照共同评价LBP作为佐剂的免疫增强效果。结果显示,小鼠血清中针对H5灭活疫苗的特异性抗体水平在一定范围内随着LBP剂量的增加而提高。LBP在800μg剂量时血清特异性抗体水平较无佐剂组显著增强,并与氢氧化铝佐剂组大致相当。因而,LBP有可能成为一种有效的流感灭活疫苗免疫佐剂。     

CpG motif的免疫调节作用及机制

CpGmotif是以CpG二核苷酸为核心的,未甲基化的特殊的DNA序列,在微生物基因组中的出现频率高于在脊椎动物中的出现频率,近年来发现这种特殊的基序具有许多免疫调节作用。如刺激淋巴细胞增殖,分泌细胞因子,产生IgG2a类抗体,诱导Th1类应答,本介绍这种独特的CpGmotif的特征,可能的调节机制及应用前景。     

表面展示新城疫病毒部分F蛋白的重组干酪乳杆菌的构建及其免疫原性

本研究旨在构建重组干酪乳杆菌pLA-Newcastlediseasevirus (NDV)-F/Lactobacillus casei,获得表达产物,并探讨其免疫效果。利用PCR扩增携带部分主要抗原表位的NDV F基因,与穿梭质粒pLA连接转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中,筛选阳性重组质粒,将其电转化至干酪乳杆菌中,构建重组干酪乳杆菌pLA-NDV-F/L. casei,应用PCR鉴定阳性菌株,Western blotting鉴定重组菌反应原性,间接免疫荧光、流式细胞术和激光共聚焦检测蛋白表达情况。试验选用14日龄雏鸡,各组免疫方式为口服+滴鼻。设立pLA-NDV-F/L. casei两次免疫组和三次免疫组、弱毒疫苗组、 pLA/L.casei、未攻毒PBS组和攻毒PBS组。间接ELISA方法检测雏鸡血清IgG、肠道、鼻腔、肺脏中sIgA抗体效价,评价试验组雏鸡攻毒保护率。结果表明,有94.10%的重组菌表达了F蛋白,且高效表达在干酪乳杆菌细胞表面,蛋白大小为62kDa,并能与抗NDV阳性血清特异性结合。各免疫组anti-F IgG和s Ig A抗体水平显著高于对照组,p LA-NDV-F/L. casei三次免疫组抗体持续时间比两次免疫组延长28 d,抗体峰值没有显著差异。免疫pLA-NDV-F/L. casei三次、两次、弱毒疫苗、pLA/L. casei和PBS的攻击保护率分别为80%、80%、90%、0%和0%。因此,利用干酪乳杆菌表达体系成功表达了携带部分抗原表位的NDVF基因,具备良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫应答。     

Aberrant,ectopic expression of VEGF and VEGF receptors 1 and 2 in malignant colonic epithelial cells. Implications for these cells growth via an autocrine mechanism

Vascular endothelial growth factor A (referred to as VEGF) is implicated in colon cancer growth. Currently, the main accepted mechanism by which VEGF promotes colon cancer growth is via the stimulation of angiogenesis, which was originally postulated by late Judah Folkman. However, the cellular source of VEGF in colon cancer tissue; and, the expression of VEGF and its receptors VEGF-R1 and VEGF-R2 in colon cancer cells are not fully known and are subjects of controversy.     

肿瘤DNA疫苗佐剂研究进展

对近年来在增加肿瘤DNA疫苗免疫原性、提高肿瘤DNA疫苗效力方面所取得的进展予以综述。简要阐述了以下几种较有效的增强肿瘤DNA疫苗效力策略的机制和进展：（1）以细胞因子表达质粒为佐剂;（2）以质粒编码的趋化因子、协同刺激分子、共刺激分子、补体为佐剂;（3）以CPGODN为佐剂;（4）其他一些佐剂。     

儿童迁延性腹泻患者肠道菌群和肠黏膜屏障功能的 变化以及双歧杆菌三联活菌散的干预作用

目的探讨儿童迁延性腹泻患者肠道菌群和肠黏膜屏障功能的变化以及双歧杆菌三联活菌散的干预作用。方法选取儿科就诊迁延性腹泻患儿40例为观察组,予以双歧杆菌三联活菌散1.0g/次,3次/d,溶解于温水中口服,连用8周,检测观察组患儿治疗前后肠道菌群数量及肠黏膜屏障指标的变化。另选择同期在我院体检的正常儿童30例为对照组。结果观察组患儿治疗前双歧杆菌、乳杆菌的数量及B/E比值明显少于对照组,而大肠埃希菌数量明显多于对照组(P0.05)。治疗8周后,观察组患儿双歧杆菌、乳杆菌的数量及B/E比值较治疗前明显上升,大肠埃希菌数量较治疗前明显下降(P0.05);观察组患儿治疗前血清D-乳酸、PCT和DAO水平明显高于对照组(P0.05)。治疗8周后,血清D-乳酸、PCT和DAO水平较治疗前明显下降(P0.05)。结论儿童迁延性腹泻患者存在肠道菌群紊乱,引起肠黏膜屏障功能受损,肠黏膜的通透性异常。双歧杆菌三联活菌散治疗儿童迁延性腹泻患者可纠正肠道菌群紊乱,保护肠黏膜屏障功能,降低其通透性,达到治疗腹泻的目的。     

乳酸乳球菌作为黏膜免疫活载体疫苗传递抗原的研究进展

乳酸菌是人和动物肠道内的常见细菌,被公认为安全级(generally recognized as safe,GRAS)微生物。近年来,对于乳酸菌作为宿主菌表达外源蛋白或抗原的研究取得了一定进展。乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)是乳酸菌的代表菌种,以其生长迅速、易于操作等优点成为表达外源抗原,作为黏膜免疫活载体疫苗的理想菌株。随着对乳酸乳球菌基因工程的研究逐渐深入,已发展了一系列组成型和诱导型乳酸乳球菌表达系统以及蛋白定位系统。破伤风毒素片段C、布氏杆菌L7/L12蛋白等多种病原微生物抗原已成功在乳酸乳球菌中表达,并已证明部分重组乳酸乳球菌作为黏膜免疫疫苗可以同时刺激局部黏膜免疫应答和系统免疫应答。目前,如何使活载体乳酸乳球菌以最佳方式向黏膜免疫系统提呈抗原继而诱导有效免疫反应是该领域的研究热点,也是巨大挑战。实现外源抗原在乳酸乳球菌中的准确定位及与细胞因子的共表达是未来研究的重要方向之一。乳酸乳球菌作为黏膜免疫活载体疫苗传递外源抗原具有广阔的应用前景。     

表皮生长因子和降钙素基因相关肽在高频电磁场 治疗急性胃损伤中作用研究

目的：探讨高频电磁场（high-frequency electromagnetic fields,HEMFs）曝露治疗急性胃损伤的作用机制。方法：选用健康SD大鼠,以Indomethacin灌胃法复制胃粘膜急性损伤模型,观察40．68MHz HEMFs（波长为7．3m）曝露（微热量,30—50mA,15min,1／d）治疗1或6次后,大鼠胃粘膜损伤程度（胃损伤指数和病理损伤积分）、胃粘膜血流量、血浆表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）和降钙素基因相关肽（calcitonin gene—related peptide,CGRP）水平。结果：HEMFs曝露1次后,胃粘膜血流量较对照组明显升高（P〈0．05）,大鼠胃粘膜损伤程度、血浆EGF和CGRP水平较对照组均无显著性差异（P均〉0．05）;HEMFs曝露6次后,胃粘膜损伤程度较对照组明显改善（P均〈0．05）,胃粘膜血流量显著升高（P〈0．05）,血浆EGF和CGRP水平较对照组无显著性差异（P均〉0.05）。结论：HEMFs曝露治疗大鼠胃粘膜急性损伤可能与其增加胃粘膜血流量有关,与血EGF和CGRP无关。     

探讨屎肠球菌的VanA调控人正常结直肠 黏膜细胞FHC凋亡的机制

摘要：目的 探讨屎肠球菌的万古霉素替考拉宁A型抗性蛋白/D-丙氨酸-D-丙氨酸连接酶（Vancomycin Teicoplanin A-type resistance protein D-alanine-D-alanine ligase,vanA）调控人正常结直肠黏膜细胞FHC凋亡的机制。方法 在人正常结直肠黏膜细胞FHC中使用屎肠球菌感染,Annxin-V染色检测细胞凋亡情况。使用屎肠球菌的VanA蛋白刺激,检测FHC细胞凋亡情况、ROS水平以及ROS标志蛋白MDA、GSH和SOD的表达水平。ROS抑制Acetylcysteine处理VanA刺激的FHC细胞后,检测细胞凋亡相关蛋白的表达水平。结果 屎肠球菌与人正常结直肠黏膜细胞FHC共培养后,人正常结直肠黏膜细胞FHC的凋亡水平明显升高（t=2.876,P=0.045 2）,并且VanA蛋白能促进FHC凋亡水平（t=5.579,P=0.005 1）,同时细胞凋亡相关蛋白CLEAVED-CAS9、BAK的表达量上升,BCL-2的表达量下降。屎肠球菌的VanA蛋白刺激后,发现正常结直肠黏膜细胞FHC的ROS水平上升（t=10.190,P=0.000 5）,ROS标志蛋白MDA（t=4.315,P=0.012 5）和SOD（t=5.751,P=0.004 5）的表达水平上升,GSH（t=5.225,P=0.006 4）的表达水平下降,但是,ROS抑制剂Acetylcysteine能够抑制这种现象。结论 屎肠球菌的VanA通过提高细胞内ROS水平来促进人正常结直肠黏膜细胞FHC凋亡。     

双歧三联活菌胶囊对急性胰腺炎患者肠黏膜屏障功能的保护作用

目的探讨双歧三联活菌胶囊对急性胰腺炎患者肠黏膜屏障功能的保护作用。方法选取急性胰腺炎患者66例,随机分为观察组和对照组。两组患者均予以禁食水、持续胃肠减压、解痉镇痛、抗感染、抑制胃酸分泌、生长抑素、改善局部微循环和保持水电解质酸碱平衡等常规治疗。观察组患者加用双歧杆菌三联活菌胶囊420mg水化后自胃管灌注,夹管1．5h,3次／d,连用7d。观察两组患者的治疗前后肠黏膜屏障功能的变化情况,并比较其临床疗效。结果治疗7d后,两组患者血清内毒素、TNF—α和D-乳酸水平均有明显下降（P〈0．05或P〈0．01）,且观察组下降值比对照组更明显（P〈0．05）;同时观察组患者临床总有效率为93．94％,明显高于对照组的75．76％（χ2=4．24,P〈0．05）。结论双歧杆菌三联活菌胶囊治疗急性胰腺炎效果较好,能降低血清内毒素、TNF-α和D-乳酸水平,对患者肠黏膜屏障功能具有良好的保护作用。