损毁缰核对应激性高血压形成的影响

目的和方法 :运用核团损毁和微量注射的方法观察损毁缰核 (Hb)对应激性高血压 (SIH)形成进程的影响及SIH大鼠Hb内神经元对L 谷氨酸 (Glu)反应性的变化。结果 :①损毁双侧Hb延缓了SIH的形成进程 ;②在SIH大鼠内侧Hb(MHb)微量注射不同浓度的CIu ,血压明显升高 ,呈浓度依赖性 ,升高值与正常大鼠MHb注入等量GIu引起的升高值相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;③在SIH大鼠外侧Hb(LHb)注入不同浓度的Glu ,血压明显下降 ,也呈浓度依赖性 ,下降值与正常大鼠LHb注入等量Glu引起的下降值相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :损毁Hb延缓了SIH的形成进程 ,SIH大鼠Hb对Glu的敏感性提高了 ,Hb参与SIH的形成 ,且其作用有部位特异性。     

A novel technique for the partial isolation of maize embryo sacs and subsequent regeneration of plants

Summary Embryo sacs of maize isolated with a few layers of surrounding nucellus or completely isolated with digestive enzymes have resulted in either poorly visible or structurally damaged embryo sacs. We therefore developed a new, more successful method involving mechanical sectioning of maize ovaries using the Vibratome. Sections containing intact embryo sacs are viable and development is normal when sacs are cultured in vitro on semisolid Murashige and Skoog (MS) media. Embryo sacs produce endosperm (90%) and embryos (75%), and mature plants are obtained directly without callus formation or somatic embryogenesis. Immediate applications of this technique may include experimental fertilization and embryogenesis as well as genetic manipulation. Targeting of individual cells was demonstrated with microinjection and confocal microscopy. The methods developed in this study provide a way of studying maize embryo sac development and transformation.     

乳腺特异高表达人促红细胞生成素转基因奶山羊的制备

目的制备乳腺特异性高表达人促红细胞生成素（hEPO）转基因奶山羊。方法采用牛β-乳球蛋白基因（BLG）调控元件和hEPO全长编码序列基因组DNA构建真核表达载体,应用受精卵原核注射的方法制备hEPO转基因山羊。结果在原核注射获得的188头羔羊中,经Southern blot法检测有4头羊含有hEPO基因,其中3头为母羊,1头公羊于出生后20d死亡;3头转基因母羊hEPO基因的拷贝数分别为1、10、2;Western blot检测结果显示转基因羊乳中的hEPO分子质量为32kDa;MTT法检测结果表明,在泌乳10d的3只转基因羊乳汁中,每毫升乳汁中hEPO活性分别达到1.17×10^2IU、1.90×10^4IU、1.91×10^4IU。结论牛BLG能够调控hEPO基因在山羊乳腺中高表达,为实现其他药用蛋白在山羊乳腺中表达奠定了基础。     

卵胞内微注射mRNA后胞膜上出现的新离子流

以胞内微注射技术向爪蟾卵内注射羊气管上皮细胞抽提的Poly(A)~ mRNA,以电压钳技术观察卵膜离子流的变化。注射前卵膜上主要有Ca~(2 ),Cl~-,K~ 和Na~ 流,在高钙溶液(10Ca-ND96)中,瞬间的Ca~(2 )激活Cl~-流较大,此离子流可被9-羟蒽阻断。注射mRNA后在9-羟蒽存在的情况下,向浴槽加入1mmol/L 8-Br-cAMP后新出现一个电压敏感的离子流,使电流电压曲线的零电流电位向右移;但在注射去离子水组未见此离子流。表明羊气管上皮里含有cAMP敏感的离子通道,并可被移植到爪蟾卵膜上。     

动物转基因技术的新进展

到目前为止,原核注射是最可靠,也是使用最广泛的动物转基因方法.但该方法存在整合效率太低及不能定点整合的问题.在过去的20年里,出现了一些新的转基因方法,包括精子介导、反转录病毒介导、携带外源基因体细胞的核移植、ＥＳ细胞基因打靶技术等.但这些方法都未能根本地解决存在的问题.最近的一些文献中报道转基因技术在原有方法的基础上做出了改进后,取得了突破性进展.     

遗传修饰小鼠胚胎干细胞种系嵌合体小鼠的研制

利用显微注射的方法,分别将三株不同类型的经过遗传修饰的中靶ES细胞注射到C57BL/6J小鼠的囊胚中,通过胚胎移植将注射后的囊胚引入受体小鼠子宫中,分别获得了不同整合度的嵌合体小鼠,将高碳合度小鼠与C57BL/6J小鼠杂交,对这些仔鼠进行PCR及Southern鉴定的结果表明,三株修饰后的ES细胞均能整合入生殖系,得到了棕褐色子代鼠,表明获得了种系嵌合体小鼠。     

慢病毒载体法制备遗传工程猴和小型猪的现状及应用前景展望

较小鼠等啮齿类动物而言,猴和小型猪等大型实验动物在亲缘关系上与人类更为接近,在解剖、生理生化代谢及疾病发病机制等多方面与人类更接近,使它们在复制人类疾病模型,研究疾病发病机制和新药研发等中有无可替代的应用。而制备遗传工程大动物可以更深入地解析人类疾病,并可为器官移植和新药研发提供更充分的实验材料。基于慢病毒介导的转基因方法近几年已越来越多地被用来制备遗传工程猴和小型猪。与传统的原核显微注射方法和体细胞核移植法相比,慢病毒介导的转基因方法转基因效率高,操作更简单。因此,构筑基于慢病毒介导的转基因方法制备遗传工程猴和小型猪的技术平台将对生物医学研究产生巨大推动作用。     

青鱼β-actin基因克隆及其启动子功能的初步检测

高保真PCR克隆青鱼β-actin基因开放阅读框和5’端侧翼序列,DNA测序结果表明：青鱼β-actin基因开放阅读框编码一段含375个氨基酸的蛋白,与其他物种actin家族相比较具有高度保守性。青鱼β-actin与鲤鱼、草鱼及斑马鱼的同源性均为100％,而与人和Norway鼠β-actin的同源性均为99.2％,与鸡和Kenyan爪蟾β-actin的同源性分别为98．9％和98．1％。将青鱼β-actin基因5’端启动调控区插入不含启动子的pEGFP1载体构建青鱼β-actin启动子／EGFP表达载体,与第一次卵裂之前显微注射该重组质粒入泥鳅受精卵,同时也用该重组质粒转染HeLa细胞系。观察结果表明：GFP在50％的泥鳅胚胎和2／3的HeLa细胞有所表达。GFP在泥鳅胚胎的各个部分均有表达,且在某些胚胎中GFP的表达遍布全身。因此,以EGFP为报告基因证实了青鱼β-actin基因启动子为一种非特异性表达的启动子。     

人β_2m转基因小鼠的制备及鉴定(英文)

 制备人 β2m转基因小鼠 ,研究HLA B2 70 4基因的表达 .应用显微注射将人 β2m基因注入C5 7BL 6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 .出生动物及其后代经PCR筛选 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本进行进一步鉴定和测定整合拷贝数 ,利用RT PCR检测阳性鼠中人 β2m转基因的表达 .6只原代仔鼠及 7只它们的下一代鼠 (F1)带有人 β2m基因 .由微注射基因后移卵出生的 86只小鼠中 ,C5 7BL 6×昆明鼠杂交仔鼠 35只 ,其中 4只阳性 (11 4 % ) ,昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠 5 1只 ,其中 2只阳性 (3 9% ) ,含有人 β2m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠 2 0只 ,其中 7只阳性 .整合的转基因均为单拷贝 .Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人β2m转基因mRNA的表达 .在转基因动物制备中 ,C5 7BL 6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代 .与人HLA B2 70 4基因相比 ,人 β2m基因不易整合 ,其整合率与整合拷贝数均较低 .得到的人 β2m转基因小鼠能够将人 β2m基困传给下一代 ,并可与人HLA B2 70 4转基因鼠交配 ,研究它的致病性     

Effect of antikeratin microinjection on the embryonic development of Xenopus laevis

Anti-keratin monoclonal antibody AF5 was introduced into fertilized eggs of Xenopus laevis.,and its effects on embryonic development were studied.Survival rate of the antikeratin-injected embryos was much lower(only 35.67% at gastrula)than that of the control(74.85% at gastrula),in which embryos were injected with mouse IgG.Most of survivors in the experimental series showed aberrant external appearance.On the other hand,in cleavage stage,ie 2-7h after fertilization,immunohistochemical staining of embryos showed that the expermental embryos were mostly keratin negative,while embryos of the control ones were keratin positive.When introducing this antikeratin into one cell of a 2-cell embryo,only the uninjected half of the embryo continued its development while the other half could not develop at all.These results suggested that intact keratin cytoskeleton in early embryos is indispensable to the embryonic development of Xenopus laevis.