荧光定量PCR检测干旱胁迫下长春花Crlea基因的相对表达

首次从长春花中克隆了Crlea（Crlea for Catharanthus roseus late embryogenesis abundant）的全长基因,采用荧光定量PCR方法对干旱胁迫下长春花叶片和根部Crlea基因的表达模式进行监测,结果表明,在0.5～8 h的胁迫时间中,叶片和根部的Crlea基因表现出相似的积累模式。长春花Crlea基因的表达随着胁迫时间的延长而表达增强。在叶片中,在6 h和8 h的干旱处理后,Crlea基因表达显著提高,分别是未处理材料的9.984和20.431倍。在根部, 在8 h的处理后,Crlea基因的表达量显著提高（2.831倍于对照)。初步结果表明Crlea基因的表达没有组织特异性,并且为干旱胁迫正调控。     

恶性肿瘤组织中结核杆菌DNA的检测

目的　探讨结核杆菌感染与恶性肿瘤的关系。方法　采用多聚酶链反应（ＰＣＲ） 技术检测两种恶性肿瘤组织中结核杆菌ＤＮＡ（ＴＢ－ ＤＮＡ） 。结果４１ 例恶性肿瘤组织中检出ＴＢ－ ＤＮＡ 阳性患者８ 例,占１９．５ ％ ,且ＴＢ－ＤＮＡ 阳性患者肿瘤发病部位基本与结核病的好发部位一致。结论 结核杆菌感染可能与一些恶性肿瘤存在特殊相关性。     

怀地黄ISSR扩增条件优化的研究

用CTAB法提取怀地黄嫩叶DNA,进行简单重复间序列标记(ISSR)分析.通过单因子实验分别研究了退火温度、Taq酶单位、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和模板DNA浓度对ISSR-PCR反应的影响,找出各自的合适条件,而且每一个合适条件确定以后都被作为后续研究的一个条件.通过各个因子的组合研究建立了适宜于怀地黄ISSR分析的扩增体系25 μL PCR反应体积,1×Taq DNA酶缓冲液(10 mmol/L Tris-HCl,50 mmol/L KCl,0.1% Trion X-100,pH9.0 ),2.5 mmol/L MgCl2,1.5～1.0 U Taq酶,60 ng模板DNA,0.4 μmmol/L引物,各0.4 mmol/L的dATP、dGTP、dCTP和dTTP.合适的退火温度为53～55℃.为用ISSR技术分析鉴定怀地黄种质资源奠定了良好的基础.     

Mycorrhizal colonization of Pinus muricata from resistant propagules after a stand-replacing wildfire

Colonization of mycorrhizal fungi was studied in a Pinus muricata forest on the coast in California, USA, burned by a stand-replacing wildfire in October 1995. Naturally established field seedlings of P. muricata were harvested 1 yr after the fire. The species composition of the mycorrhizal fungi on these field seedlings was dominated by Rhizopogon species, Wilcoxina mikolae and Tomentella sublilacina . Bioassays, set up with soil collected immediately after the fire, were used to determine which mycorrhizal species had colonized the burned area from resistant propagules. The P. muricata seedlings in these bioassays were dominated by suilloid and ascomycetous fungi, the same fungi which dominated the mycorrhizal flora of seedlings in pre-fire bioassays derived from the same forest site, suggesting that resistant propagules were the primary inoculum source for naturally establishing seedlings. Drying of post-fire soil for 1 month raised the number of bioassay seedlings associated with Rhizopogon olivaceotinctus , while the number of bioassay seedlings associated with Rhizopogon ochraceorubens was reduced. Fire appeared to have either stimulated or provided a competitive advantage to R. olivaceotinctus , which increased in abundance on the post-fire bioassay and field seedlings. Soil collected from the burned area was diluted with sterile soil in three different concentrations, and the number and frequency of mycorrhizal taxa on bioassay seedlings decreased with increased dilution. Although precise quantification was not possible, propagules of the Rhizopogon species were much more abundant than those of Tomentella or Wilcoxina species. Differences between the mycorrhizal associates of bioassay seedlings, naturally regenerated seedlings, and different inoculum sources are discussed.     

鸭儿芹羟基肉桂酸转移酶基因的克隆及其对不同温度的响应

以贵州省野生鸭儿芹为研究对象,用RT-PCR克隆获得与木质素合成有关的羟基肉桂酸转移酶基因(CjHCT),并分析CjHCT基因对不同温度的响应,探索人工栽培鸭儿芹的适宜温度。结果表明:(1)CjHCT基因开放阅读框长度为1 290bp,编码429个氨基酸;蛋白质分子质量为47.58kD,等电点为6.67;进化树分析表明,CjHCT与茄科植物的HCT亲缘关系最近。(2)荧光定量PCR分析显示,CjHCT基因在贵州鸭儿芹根、叶柄、叶及花不同组织中的表达具有组织特异性,且在根中CjHCT基因的表达量最高,而在叶中表达量最低,花与叶中该基因表达量相近。(3)对鸭儿芹生长过程中主要面临的4种不同温度(10℃、18℃、30℃和38℃)分别处理0、0.5、1、2、4、8、12、24h,荧光定量PCR检测显示,CjHCT基因的表达量(以0h处理作为对照,表达量为1)在高温(30℃和38℃)处理下于0.5h时最高,其中30℃处理的CjHCT基因表达量高于38℃处理;在低温(10℃和18℃)下鸭儿芹CjHCT基因表达量于12h时最高,其中10℃处理0.5h时CjHCT基因较对照表现为下调;高温(30℃和38℃)下CjHCT基因表达量峰值比低温(10℃和18℃)下表达量峰值高,而且峰值出现的时间也较早。该实验意义在于初步研究发现低温栽培鸭儿芹能抑制CjHCT基因的表达,为人工栽培鸭儿芹温度调控提供了参考。     

80％门静脉结扎后肝脏组织中MMP-9的表达与肝再生作用的相关性研究

目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在大鼠80％门静脉分支结扎模型中大鼠增生肝脏组织中的表达及其与肝再生作用的关系。方法：健康SD雄性大鼠48只,随机平均分成假手术对照组（Sham）和门静脉结扎实验组（PVL）。观察术后1、3、7和14d保留侧肝叶重量／体重比值;下腔静脉采血后检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）值的变化;光镜下观察保留侧肝脏组织的病理形态变化;用免疫组化法检测增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达,用免疫印记法检测MMP-9的表达,并进行统计分析。结果：80％门静脉分支结扎后,结扎侧肝叶呈进行性萎缩,保留侧肝叶重量／体重比值逐渐增加,7d达“平台期”;与对照纽明显不同,PVL组的ALT、AST的值在1h达到高峰,7d后回到正常水平;保留侧肝脏组织中PCNA阳性细胞计数与对照组比较,3d开始表述增强（P〈0．05）,7d以后逐渐恢复至正常水平（P〉0．05）;保留侧肝叶MMP-9蛋白的表达在术后3d开始增加,术后7d达到高峰。结论：MMP-9蛋白的表达在80％门静脉结扎后大鼠肝再生过程中发挥重要作用。     

Analysis of ribosomal DNA restriction patterns in the genusKluyveromyces

Riboprinting was used to determine the relationships among strains belonging to 15 species of the genusKluyveromyces. The small subunit ribosomal RNA gene (SSU rDNA) was amplified using the Polymerase Chain Reaction (PCR) and subjected to a battery of nine restriction enzymes. Similarity coefficients between strains were calculated based on shared and unique restriction fragments. Cluster analysis revealed three major groups that generally correlated with previously reported relationships based on other molecular data. Variations in SSU rDNA restriction fragments may be used for differentiation of theKluyveromyces strains included in this study.The U.S. Government right to retain a non-exclusive, royalty free licence in and to any copyright is acknowledged.     

IL35慢病毒质粒的提取

[目的]构建可以大规模提取IL35的新型质粒p LVX-IRES-Zs Green1-mus-IL35。[方法]质粒p LVX-IRES-Zs Green1和p UC57-mus-IL35-拼接用XhoⅠ和NotⅠ进行双酶切,将回收纯化的目的片段mus-IL35-拼接(NotⅠ/XhoⅠ)与回收纯化的载体p LVX-IRES-Zs Green1(NotⅠ/XhoⅠ)连接,连接产物命名为p LVX-IRES-Zs Green1-mus-IL35-拼接。连接产物转化DH5α感受态细胞,涂布LB Amp平板,37℃温箱培养过夜。[结果]检测慢病毒p LVX-IL35滴度为:6×10~7TU/ml,提取质粒浓度为1～2 mg/ml。鉴定引物为测序的通用引物,上游引物和下游引物离MCS区域加上目的序列,目的PCR条带大约1 600 bp,送鉴定正确菌液测序。测序结果比对正确。[结论]采用新型超量无内毒素质粒提试剂盒,可以大规模方便快速提取相关质粒。     

昆虫与寄主植物营养关系的DNA分子追踪

农田生态系统中昆虫与寄主植物的食物营养关系错综复杂,利用田间直接观察法、肠道内含物形态学分析、同位素标记等方法都难于全面解析,常造成营养关系的缺失。近年来,DNA分子追踪技术迅速发展,利用一段较短的DNA序列能有效鉴别植食性昆虫取食寄主植物的种类,为这一领域研究提供了新方法。本文全面介绍了3种DNA分子追踪技术——诊断PCR技术、克隆测序技术和下一代测序技术(next generation sequencing,NGS)。其中诊断PCR技术包括单一PCR技术和多重PCR技术,适用于目标昆虫与已知寄主植物之间的营养关系分析;克隆测序技术能够在寄主植物种类未知的前提下,解析目标昆虫完整的寄主植物种类信息;下一代测序技术实现了短时间内对混合样品的测序,加之昆虫与植物DNA条形码序列数据库大量扩增,有效地提高寄主植物的鉴别能力。诊断PCR技术和克隆测序技术已在追踪地下害虫的取食行为、植食性昆虫取食范围及其在寄主植物间的转移与选择习性等方面被广泛应用,且进展明显。综合考虑各种技术的优缺点,本文提出将DNA分子追踪技术与同位素标记等其他方法相结合的研究策略,以便系统解析农田生态系统中昆虫与寄主植物之间的营养关系。