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Human recombinant [C22A] FK506-binding protein amide hydrogen exchange rates from mass spectrometry match and extend those from NMR. 总被引:1,自引:1,他引:1 下载免费PDF全文
Z. Zhang W. Li T. M. Logan M. Li A. G. Marshall 《Protein science : a publication of the Protein Society》1997,6(10):2203-2217
Hydrogen/deuterium exchange behavior of human recombinant [C22A] FK506 binding protein (C22A FKBP) has been determined by protein fragmentation, combined with electrospray Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry (MS). After a specified period of H/D exchange in solution, C22A FKBP was digested by pepsin under slow exchange conditions (pH 2.4, 0 degree C), and then subjected to on-line HPLC/MS for deuterium analysis of each proteolytic peptide. The hydrogen exchange rate of each individual amide hydrogen was then determined independently by heteronuclear two-dimensional NMR on 15N-enriched C22A FKBP. A maximum entropy method (MEM) algorithm makes it possible to derive the distributions of hydrogen exchange rate constants from the MS-determined deuterium exchange-in curves in either the holoprotein or its proteolytic segments. The MEM-derived rate constant distributions of C22A FKBP and different segments of C22A FKBP are compared to the rate constants determined by NMR for individual amide protons. The rate constant distributions determined by both methods are consistent and complementary, thereby validating protein fragmentation/mass spectrometry as a reliable measure of hydrogen exchange in proteins. 相似文献
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介绍了微量量热系统的基本结构和工作原理,以及微量量热法在酶学、细胞生物学、微生物学、植物生理学研究中的应用。 相似文献
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谷氨酰胺合成酶是生物体氮代谢的中心酶之一,在消耗ATP的情况下,谷氨酰胺合成酶催化由谷氨酸和NH4+向谷氨酰胺的转化,Toch ikura提出了将酵母发酵与纯化酶结合生产谷氨酰胺(G ln)的方法,本实验通过建立酶法合成L-G ln与酵母酒精发酵的能量偶联体系,研究了在此偶联体系中各因素对谷氨酰胺酶转化效率的影响,为工业上利用酶法生产G ln提供理论依据。 相似文献
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吕沁风吴忠华郑伟徐琦孟军李禾 《现代生物医学进展》2011,11(3):493-496
目的:研究不同的加热方式对嗜肺军团菌环介导等温扩增检测法的影响方法:用已知的13株嗜肺军团菌样本,采用空气浴、水浴和PCR仪同时进行环介导等温扩增,观察沉淀反应、荧光反应以及产物电泳结果。结果:水浴和PCR仪加热LAMP反应的沉淀产物较多,荧光反应较强,电泳检测结果较为明显。空气浴的3种检测结果均较弱。结论:采用水浴和PCR仪进行环介导等温扩增反应的效果较好,从仪器设备的成本及实验条件考虑,采用水浴是环介导等温扩增反应首选的加热方式。 相似文献
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Effects of ligand binding on the stability of aldo–keto reductases: Implications for stabilizer or destabilizer chaperones 下载免费PDF全文
Aurangazeb Kabir Ryo P. Honda Yuji O. Kamatari Satoshi Endo Mayuko Fukuoka Kazuo Kuwata 《Protein science : a publication of the Protein Society》2016,25(12):2132-2141
Ligands such as enzyme inhibitors stabilize the native conformation of a protein upon binding to the native state, but some compounds destabilize the native conformation upon binding to the non‐native state. The former ligands are termed “stabilizer chaperones” and the latter ones “destabilizer chaperones.” Because the stabilization effects are essential for the medical chaperone (MC) hypothesis, here we have formulated a thermodynamic system consisting of a ligand and a protein in its native‐ and non‐native state. Using the differential scanning fluorimetry and the circular dichroism varying the urea concentration and temperature, we found that when the coenzyme NADP+ was absent, inhibitors such as isolithocholic acid stabilized the aldo–keto reductase AKR1A1 upon binding, which showed actually the three‐state folding, but destabilized AKR1B10. In contrast, in the presence of NADP+, they destabilized AKR1A1 and stabilized AKR1B10. To explain these phenomena, we decomposed the free energy of stabilization (ΔΔG) into its enthalpy (ΔΔH) and entropy (ΔΔS) components. Then we found that in a relatively unstable protein showing the three‐state folding, native conformation was stabilized by the negative ΔΔH in association with the negative ΔΔS, suggesting that the stabilizer chaperon decreases the conformational fluctuation of the target protein or increase its hydration. However, in other cases, ΔΔG was essentially determined by the delicate balance between ΔΔH and ΔΔS. The proposed thermodynamic formalism is applicable to the system including multiple ligands with allosteric interactions. These findings would promote the development of screening strategies for MCs to regulate the target conformations. 相似文献
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基于生态足迹修正模型的江苏省海洋经济可持续发展分析 总被引:2,自引:0,他引:2
基于生态足迹的理论和方法,提出海洋生态足迹的概念,并根据江苏省海洋环境的特殊性,构建了渔业用海、交通运输用海、工程建筑用海、能源用海、滩涂5个海洋生态足迹子模型,采用改进熵值法确定5类用海的均衡因子,分析了2000-2008年江苏省海洋生态足迹和生态承载力.结果表明:2000-2008年间,江苏省人均海洋生态足迹增幅近7倍,从36.90 hm2上升到252.94 hm2;人均生态承载力从105.01 hm2增至185.49 hm2,呈平稳增长态势;2000年,江苏省海洋环境处于生态盈余状态,海洋经济呈弱可持续发展状态,2004年,海洋生态环境急剧恶化,生态赤字高达109660.5 hm2,海洋经济可持续能力下降.渔业用海的高生态足迹是造成江苏省海洋生态赤字的主要原因,滩涂是维持江苏省海洋经济可持续发展的重要后备资源. 相似文献
130.
雪花莲凝集素基因转化小麦及转基因小麦抗蚜性的研究 总被引:21,自引:1,他引:21
雪花莲凝集素对具有刺吸式口器的同翅目害虫具有毒杀作用。用基因枪法将1个新的雪花莲凝集素(GNA)基因转入普通春小麦品种中-60634和生产上正在推广的冬小麦高产品种——豫麦66中,分别获得了转基因小麦植株。抗蚜实验证明,转化gna基因的小麦植株对我国北方冬麦区的主要麦蚜——麦长管蚜和禾谷缢管蚜的抗性效果不尽相同。对禾谷缢管蚜,在接种当代即表现出明显的毒杀作用。对麦长管蚜,则表现为虫体发育减缓并且降低了其所生产的若蚜成活率。在自然放养条件下,gna基因则对这两种麦蚜的取食均起到了一定的抑制作用。 相似文献