NF-κB信号和MAPK通路在椎间盘退变中的研究进展

椎间盘退变涉及诸多因素,其中由细胞外基质分解代谢和合成代谢失衡导致的基质减少发挥了很大的作用,但这些变化的发生还没被全部阐明。由丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和核因子kappaB（NF-κB）通路介导的细胞因子在代谢失衡中发挥重要作用,所以,研究细胞因子产生作用的信号转导通路对深入了解椎间盘退变的原因及为其治疗提供了新的方向。对NF-κB和MAPK信号转导通路及其在椎间盘退变中的作用机制加以综述。     

ERK1/2在高温致神经管畸形神经上皮细胞中的表达变化

目的 探讨高温致神经管畸形(NTDs)作用的分子机制,为防治NTDs的发生提供理论依据.方法 在高温致金黄地鼠NTDs模型的基础上,应用免疫荧光染色技术,观察NTDs发生过程中p-ERK1/2在鼠胚神经上皮细胞中的表达变化.结果 对照组和实验组孕鼠在高温水浴处理后16、24h,p-ERK1/2免疫阳性产物分布于鼠胚神经上皮细胞和周围间充质细胞的胞浆中;水浴后36、60h,p-ERK1/2表达部位出现了由细胞浆向细胞核的转移;高温处理后,p-ERK1/2在实验组各期胚胎神经上皮细胞内的表达均比对照组减弱.结论 ERK1/2参与胚胎神经管的发育过程,其表达降低在高温致神经管畸形的发生中起重要作用.     

灰仓鼠多房棘球蚴腹腔动物模型的建立

目的观察多房棘球蚴(Echinococcus muhilocularis E.m)在灰仓鼠腹腔内的生长发育规律,制作E.m灰仓鼠动物模型。方法 2000个E.m原头节/只剂量腹腔接种灰仓鼠,接种后10、15、18、22、39、60、80和100 d,测量包囊重量和抗体,计算包囊重与灰仓鼠体重的包囊系数,观察多房棘球蚴在灰仓鼠体内的发育规律。分别按100个/只、500个/只和2000个/只剂量腹腔接种灰仓鼠各10只,100 d后剖检比较不同感染剂量的包囊发育情况和感染率。结果 62只灰仓鼠中有59只感染了多房棘球蚴。18 d可观察到成熟原头节,感染率达到100%,15 d出现抗体阳性,60 d时包囊系数达到15%以上;100、500和2000三种剂量的感染率100%;结论建立的灰仓鼠腹腔多房棘球蚴动物模型具有感染率高,感染周期短,包囊生长发育和抗体滴度变化易观察,感染60 d可作为E.m动物模型成模观察期。包囊系数,抗体滴度和包囊发育变化可作为造模的主要参考指标。雌性灰仓鼠造模优于雄性。     

固有免疫信号因子TRIF在肝纤维化中的表达

目的初步探讨TOLL样受体下游重要信号因子TRIF与肝纤维化发生发展的病理机制关系。方法以四氯化碳皮下注射+低蛋白高脂饮食+酒精饮料的方法复制大鼠肝纤维化模型。将SD大鼠随机分成正常对照组和模型组,在完成制备模型实验后进行取材。部分实验鼠进行心脏生理盐水和多聚甲醛灌注后,取肝脏组织制备石蜡切片,进行常规HE染色和免疫组化实验;另一部分实验鼠脱颈安乐死后,取新鲜肝组织进行电镜标本的制备和Western Blot实验检测。结果 HE染色结果显示与而正常对照组大鼠相比,模型组大鼠肝小叶结构明显破坏,肝细胞数量明显减少和肝纤维化程度等特点明显;电镜结果也显示,肝纤维化组可见大量胶原纤维沉积现象,胞质可见明显的溶解现象,在狄氏腔内,肝星状细胞的细胞核溶解,血窦内皮细胞胞质、胞核皆溶解;免疫组化模型组大鼠肝组织均显示内皮细胞、星形细胞等TRIF都有强烈高表达,并且以胞核表达为主,亦见胞质表达,而正常组呈现弱阳性表达;与正常对照组相比,模型组大鼠肝组织TRIF蛋白表达都明显升高,呈显著性差异(P<0.01),与形态学的表达特点相一致。结论 TRIF在肝纤维化中表达显著增强,说明在肝纤维化过程中,TOLL样受体明显激活,并且通过下游信号转导途径,在机体内产生一系列的免疫应答反应。通过该现象的观察,我们初步证实了TOLL样受体固有免疫信号因子TRIF在纤维化形成中起着重要的作用。     

人呼吸道合胞病毒融合蛋白(F)片段原核表达、纯化和鉴定

目的克隆并表达人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)兰州株的融合蛋白(F)基因片段。方法利用PCR技术扩增HRSV兰州株的融合蛋白基因片段,克隆于原核表达载体pET-42b(+),转化大肠杆菌(Rosetta),经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化,SDS-PAGE和Western-blot分析重组蛋白的表达及其反应原性。结果 PCR扩增得到951 bp的DNA片段,重组质粒pET42b-F经酶切鉴定和测序分析,表明质粒构建正确。表达的重组蛋白的相对分子质量为68 710,表达的重组蛋白占总菌体蛋白的7%,纯化后蛋白纯度达80%。经Western-blot分析,重组蛋白与抗RSV的单抗呈专一性强阳性反应。结论成功构建了HRSV兰州株F基因片段原核表达载体,并在大肠杆菌Rosetta中获得了表达,表达的重组蛋白具有反应原性和特异性,为HRSV感染引起的疾病血清学诊断以及试剂盒的研发提供了材料。     

玉竹生物活性成分C对小鼠免疫功能的影响

研究玉竹生物活性成分C对小鼠细胞免疫功能的影响,并探讨其作用机制.采用MTT比色法和CFSE检测小鼠淋巴细胞转化情况,流式细胞术检测对αβT和γδT细胞增殖及CD4+ αβT细胞/CD8+αβT细胞比值的影响,ELISA法检测脾细胞培养上清中Th1细胞因子IFN-γ和Th2细胞因子IL-4的分泌水平.结果显示,玉竹生物活性成分C在一定浓度范围内可促进小鼠脾αβT细胞增殖,其中以1 000μg/mL的浓度作用最强.1 000 μg/mL浓度的玉竹生物活性成分C具有降低CD4+ αβT细胞与CD8+ αβT细胞比值,提高CD8+αβT细胞教量的作用.1 000 μg/mL浓度的玉竹生物活性成分C能有效刺激小鼠脾淋巴细胞释放细胞因子IFN-γ,而对IL-4的产生没有明显的影响.本研究为开发玉竹生物活性成分C提供实验依据.     

粗毛栓菌胞外锰过氧化物酶的纯化及性质

培养于麦草粉上的白腐担子菌粗毛栓菌分泌胞外木质纤维素降解酶(纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶)。经过超滤、盐析、离子交换层析、凝胶过滤和活性聚丙烯酰胺凝胶电泳等步骤,获得了初步纯化的锰过氧化物酶组分。利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦技术所测定的锰过氧化物酶的相对分子质量和等电点分别为35.7 ku和pI 2.8。研究结果表明,所纯化的锰过氧化物酶在407nm处具有最大光吸收峰,该酶最适作用pH值和温度分别为pH 5.3和35℃。     

基于电化学发光检测技术的乳腺癌生物标记物EZH2表达定量分析

Zeste同源染色体2增强子基因(EZH2)在人类乳腺癌中过度表达,它可以被视为一个检测肿瘤的发展和转移的生物标记物。传统技术检测或定量特异性基因表达存在一些缺点,因此,本研究拟开发电致化学发光(ECL)技术来检测和量化EZH2 mRNA的表达量。在本研究中,用生物素和三(2,2-联吡啶)钌(II)(TBR)分别标记在PCR引物的5’末端上,用作扩增靶基因,扩增产物用ECL系统进行检测。我们用癌细胞作为模型分析了该方法的有效性和灵敏度,并且将其应用于25例乳腺癌的临床样本中EZH2基因表达量的检测。检测结果表明,EZH2基因在肿瘤细胞系中过量表达,而在正常血细胞中则低表达。最重要的是,在25例临床乳腺癌样品中发现10例样品(40%)的EZH2 mRNA过度表达。此方法提供了一种新的工具来评估EZH2基因在乳腺癌中的表达水平,且有可能成为一种快速、简便和灵敏的乳腺癌检测和诊断方法。     

经尿道前列腺电切(TURP)联合输尿管镜钬激光碎石术治疗前列腺增生症(BPH)合并膀胱结石的疗效观察

目的:观察分析经尿道前列腺电切(TURP)联合输尿管镜钬激光碎石术治疗前列腺增生症(BPH)合并膀胱结石的效果。方法:本组61例患者先行膀胱结石钬激光碎石,然后采用经尿道前列腺电切术(TURP)治疗前列腺增生症。结果:61例一次性治疗成功,术后结石无残留,排尿情况较前明显改善,IPSS评分均分由24.4分降到9.4分,最大尿流率由7.2 mL/s上升到19.5 mL/s。结论:钬激光碎石及TURP同期治疗前列腺增生合并膀胱结石是安全有效的方法。     

Mean field model of acetylcholine mediated dynamics in the thalamocortical system

A recent continuum model of the large scale electrical activity of the thalamocortical system is generalized to include cholinergic modulation. The model is examined analytically and numerically to determine the effect of acetylcholine (ACh) on its steady states, linear stability, spectrum, and temporal responses. Changing the ACh concentration moves the system between zones of one, three, and five steady states, showing that neuromodulation of synaptic strength is a possible mechanism by which multiple steady states emerge in the brain. The lowest firing rate steady state is always stable, and subsequent fixed points alternate between stable and unstable. Increasing ACh concentration changes the form of the spectrum. Increasing the tonic level of ACh concentration increases the magnitudes of the N100 and P200 in the evoked response potential (ERP), without changing the timing of these peaks. Driving the system with a pulse of cholinergic activity results in a transient increase in the firing rate of cortical neurons that lasts over . Step-like increases in cortical ACh concentration cause increases in the firing rate of cortical neurons, with rapid responses due to fast acting nicotinic receptors and slower responses due to muscarinic receptor suppression of intracortical connections.