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目的 通过胞内实验验证PML-C与GINS2蛋白之间的相互作用.方法 将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PML-C和文库蛋白质粒pACT2-GINS2共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建pCMV-HA-PML-C及pCMV-Myc-GINS2真核表达载体并共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术验证二者之间的相互作用.结果 pGBKT7-PML-C诱饵蛋白质粒和pACT2-GINS2靶蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆生长;pCMV-HA-PML-C及pCMV-Myc-GINS2真核表达载体构建成功,共转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀与HA-PML-C相互作用的蛋白复合物后,用抗Myc单克隆抗体进行Western印迹检测,可以检测到Myc-GINS2蛋白.结论 利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术在胞内验证了PML-C与GINS2间存在相互作用. 相似文献
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通过RT-PCR从人外周血白细胞中钓取血管生成素(angiogenin,Ang)cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS-2-1-Ang,对其自身转录激活活性进行鉴定后,通过酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库,获得两个双阳性克隆.序列分析和同源检索表明所获候选蛋白分别为人上皮细胞素和λ晶体蛋白.构建Ang及候选蛋白标签融合表达载体并共转染COS-7细胞,利用免疫共沉淀和蛋白质印迹方法在哺乳动物细胞中验证了Ang与候选蛋白间的相互作用.为阐明Ａng促血管新生的分子机制创造了条件. 相似文献