测定a-淀粉酶活性的凝胶扩散法和组织印渍法

建立了改良凝胶扩散法和组织印渍法检测α-淀粉酶活性的方法。此法的实验条件容易控制,重复性好。组织印渍法在玉米种子吸水约5h后即可检测到α-淀粉酶活性。     

△6-脂肪酸脱氢酶的分子生物学研究进展

包括γ-亚麻酸在内的多不饱和脂肪酸由于在人类健康中的重要作用而成为有价值的产品,目前市场上对γ-亚麻酸的需求持续增长,然而当前来源难以满足市场的需求,寻找合适的替代来源将有助于解决这一问题。△^6-脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸合成途径中的限速酶,这里从△^6-脂肪酸脱氢酶的基因克隆、结构和功能的研究、系统进化和基因工程应用等方面探讨了△^6-脂肪酸脱氢酶的研究进展。     

卷枝毛霉△^6—脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的高效表达

为获得产高γ—亚麻酸的酿酒酵母工程菌株,应用RT—PCR技术,从卷枝毛霉中扩增出△^6—脂肪酸脱氢酶基因,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2．0,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYES412,用醋酸锂方法转化到酿酒酵母缺陷型菌株INVScl中,在SC—ura合成培养基中筛选到转化酵母,在合适的培养基及培养条件下,加入外源底物亚油酸,经半乳糖诱导后,收集菌体,通过气相色谱对转化酵母进行脂肪酸色谱分析,结果表明：γ—亚麻酸占总脂肪的50．07％。迄今为止,这是国内外△^6—脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母表达量最高的报道。     

miR-34a-5p靶向GMFB抑制细胞增殖对先天性巨结肠的治疗意义

目的探讨miR-34a-5p通过靶基因GMFB调控神经嵴细胞的增殖。 方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-5p在先天性巨结肠症（HSCR）和正常结肠组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-5p的靶基因,SH-SY5Y细胞转染miR-34a-5p mimics及对照miR-NC,并转染GMFB表达载体,通过CCK8检测miR-34a-5p和GMFB对神经嵴细胞增殖的影响,并通过Western Blot检测miR-34a-5p对GMFB蛋白表达的影响。采用t检验和单因素方差分析。 结果荧光定量PCR结果显示,HSCR结肠组中miR-34a-5p的相对表达量为0.43±0.10,低于正常结肠组1.15±0.18,差异具有统计学意义（t = 3.50,P < 0.01）。CCK8结果显示,miR-34a-5p mimics组细胞在培养24?h和48?h后细胞A450值分别为0.53±0.03和0.87±0.04,低于miR-NC对照组0.87±0.03,1.42±0.04。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-34a-5p mimics与GMFB 3'UTR WT载体共转染组荧光强度为0.44±0.03,低于对照miR-NC与WT载体共转染组1.02±0.06。CCK8结果所示,miR-34a-5p mimics+GMFB组细胞培养24?h和48?h后,A450值分别为0.99±0.02和1.50±0.03,高于miR-34a-5p mimics组0.53±0.03, 0.87±0.04,差异具有统计学意义（t?=?7.07,P < 0.01;t?=?9.14,P < 0.01）。Western Blot检测结果显示,miR-34a-5p mimics组细胞的GMFB蛋白表达量为0.25±0.01,低于miR-NC对照组0.90±0.03,差异具有统计学意义（t?=?35.60,P < 0.01）,miR-34a-5p mimics+GMFB组细胞GMFB蛋白表达量为1.03±0.03,高于miR-34a-5p mimics组0.25±0.01,差异具有统计学意义（t?=?42.74,P < 0.01）。 结论miR-34a-5p能够通过抑制靶基因GMFB的表达,抑制神经嵴细胞SH-SY5Y的增殖。     

P53蛋白与SV40大T抗原之间相互作用的研究

为确定一种定量研究酵母体内蛋白质-蛋白质之间相互作用的简便、快捷的方法,为抗癌小分子化合物药物筛选提供一条可行性途径。本文选择P53蛋白与SV40大T抗原为靶蛋白对,首先用酵母双杂交系统（LiAc法质粒共转化酵母细胞）方法定性证明了两者之间存在相互作用,然后通过α-半乳糖苷酶活力定量测定了相互作用力的大小,并确定了最佳酶活测定时间,并与β-半乳糖苷酶活力测定进行了比较,认为α-关乳糖苷酶活力定量测定是研究蛋白质-蛋白质间相互作用的一种更加简便快捷的方法。     

工业用油料植物播娘蒿引种初报

在四川采集到若干亚麻酸含量高的十字花科油料植物,这些植物种子的脂肪酸分析结果表明,涩荠(Malcolmia africana(L.)R.Br)和硬毛南芥(Arabis hirsuta(L.)Scop.)具有较高的亚麻酸含量,分别为57.37％和51.38％,但引种较难。播娘蒿(Decurainia sophia(L.)Webb ex Prantl)的种子含油量高,特别是红原采集的样本,其含油量达44.17％;亚麻酸含量也较高,达40.9％;引种的种子产量较高,达1264.5kg/hm~2。作者认为,这种油料植物可引种用于工业。     

应用液—液双水相抽提技术分离纯化甘油激酶、a-甘油磷酸脱氢酶及心肌黄酶

用液-液双水相抽提技术分别从嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)菌体、兔肌及猪心肌匀浆液中分离甘油激酶、a-甘油磷酸脱氢酶及心肌黄酶,研究了pH,匀浆液的量、氯化钠浓度及丙酮等因素对分配系数、上下相体积之比,酶活性回收率及分离效果等参数的影响,并确定了抽提上述三种酶的最佳相组成系统。用本文的工艺抽提甘油激酶、a-甘油磷酸脱氢酶及心肌黄酶有下列优点： 1．酶活回收率较高,分别为90％、95％及70％2：分离效果较好,通常提纯三、四倍以上3．各酶均存留在下相,即磷酸钾盐富相中,故可省去聚乙二醇(PEG)的分离工序而直接与后继精制工艺衔接,简化了工艺,在实验室及工业生产中均有实用价值。     

用新月弯孢霉11β-羟基化16a-甲基化合物RS-21醋酸酯

对新月弯孢霉AS3．4381的菌丝体转化16a-甲基Reicbstein's 化合物S21-醋酸酯(I)生成16a-甲基氢化可的松(II)进行了研究。培养24h的菌丝体的11β-羟基化活性最高;乙醇对此羟基化活性的抑制作用明显。当(1)浓度为0.15％,转化72h,产物(II)的重量收率为55.4％。     

枯草芽孢杆菌BF7658a-淀粉酶的性质

枯草芽孢杆菌(Baeillas subtilis) BF7658产生的a-淀粉酶(EC 3．2．1．1)在免疫学上与解淀粉芽孢杆菌(B．Amyloliquefaciens)产生的液化型一淀粉酶相同。 并且二者的a-淀粉酶的淀粉水解产物的层析谱带相同,分子量相等(约55000道尔顿),等电点相近(5．12和5．28);B．Subtilis Marburg 168a-淀粉酶分子量为64000道尔顿,等电点为6．12。因此,B.subtills BF7658产生的a-淀粉酶是液化型a-淀粉酶。因而建议将B．Subtilis BF7658改名为B．Amylolique]aeiens BF7658。     

r——亚麻酸发酵条件研究

本文对ｒ－亚麻酸发酵的碳源、氮源、ｐＨ值、菌体得率、油脂含量、ｒ－亚麻酸含量等进行了考察,并通过均匀设计,得到了该菌株发酵生产ｒ－亚麻酸的优化配方,用优化配方发酵结果表明,菌体得率、ｒ－亚麻酸含量均有显著的提高。