真菌发酵生产γ-亚麻酸的研究进展

综述了国内外微生物发酵生产γ-亚麻酸（GLA）的研究进展,对菌株诱变选育研究和基因工程菌株的构建情况进行了阐述,并展望了其发展前景。     

circGFRA1靶向miR-642a-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

该研究探讨了circGFRA1对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制。收集了39例RA患者的滑膜组织和39例膝关节创伤且无其他关节异常病史患者的滑膜组织(正常滑膜组织),qRT-PCR法检测组织中circGFRA1和miR-642a-5p表达情况。体外分离培养RASFs,分别转染circGFRA1小干扰RNA、miR-642a-5p模拟物,或共转染circGFRA1小干扰RNA与miR-642a-5p抑制剂后,CCK-8法、划痕实验、Transwell小室分别检测细胞增殖、迁移和侵袭;蛋白质印迹法检测细胞中Ki-67、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证circGFRA1和miR-642a-5p的调控关系。结果显示,RA患者滑膜组织中circGFRA1表达水平较正常滑膜组织显著升高(P<0.05),miR-642a-5p较正常滑膜组织显著降低(P<0.05);下调circGFRA1或上调miR-642a-5p后,RASFs细胞D值、划痕愈合率、侵袭数及细胞中Ki-67、N-cadherin蛋...     

发酵法生产γ-亚麻酸的研究进展

γ-亚麻酸是一种人体必需的多不饱和脂肪酸,具有多种重要的生理功能。最初γ-亚麻酸主要来源于植物种子油,如黑醋栗、月见草和琉璃苣等的种子油。但是从植物中提取γ-亚麻酸受到诸多因素的限制,远不能满足市场需求,采用微生物发酵法生产γ-亚麻酸具有广阔的应用前景。本文综述了目前发酵生产γ-亚麻酸的菌株,对其代谢途径进行了分析,重点总结了国内外有关菌种选育及发酵调控方面的研究,并探讨了今后的研究方向。     

γ——亚麻酸生产菌深黄被孢霉原生质体的形成和再生

采用２％的溶壁酶加４％的蜗牛酶,从深黄被孢霉的菌丝中获得了大量的原生质体,同时对菌丝的培养时间,渗透压稳定性,酶解系统和酶解温度等因素了进行了系统的观察,从而获得了制备深黄被孢霉原生质体的最适条件,并对该原生质体在高渗培养基上进行了再生实验,其再生率为３２％。     

高山被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的胞内表达

γ-亚麻酸（GLA）作为人体必需的不饱和脂肪酸,具有重要的营养和药用价值。Δ⁶-脂肪酸脱氢酶是γ-亚麻酸合成途径中的关键酶。为了在毕赤酵母中建立一种新的合成γ-亚麻酸的表达体系,将高山被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因与胞内表达载体pPIC3.5K连接,SacⅠ线性化后电击法转化毕赤酵母SMD1168,获得的转化子经PCR鉴定目的基因已整合到毕赤酵母的基因组中。用甲醇诱导表达,通过脂肪酸气相色谱和气相色谱质谱（GC-MS）联用分析表明高山被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中获得表达,γ-亚麻酸含量占总脂肪酸的16.26%。     

高山被孢霉ATCC16266△^6—脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中的表达

△^6－脂肪酸脱氢酶基因是形成γ－亚麻酸的关键酶。从含有高山被孢霉△^6－脂肪酸脱氢酶基因的重组质粒pT-MACL6中,酶切出1.4kb的目的片段,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYMAD6,用醋酸昔方法转化到酿洒酵母的缺陷型菌株INCSc1中,在SC－Ura合成培养基中,选择得到酿酒酵母工程株YMAD6。在合适的培养基及培养条件下,加入外源底物亚油酸,经半乳糖诱导后,收集菌体。通过GC－MS对酵母工程株进行脂肪酸色谱分析,结果表明,产生了31.6％的γ－亚麻酸,边是迄今为止,国内外△^6－脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中表达量最高的报道。     

紫苏种子脂肪酸组成及合成代谢研究进展

紫苏是一种新型油料作物,种子含油量为35%左右,紫苏籽油脂肪酸组成丰富,含有棕榈酸(16:0)、硬脂酸(18:0)、油酸(18:1)、亚油酸(18:2)和α-亚麻酸(18:3)等,其中α-亚麻酸(ALA)含量高达60%,广泛用于功能性保健食品、药物及油脂化工业.介绍紫苏种子脂肪酸组成及合成代谢基本途径,对近年来脂肪酸合成代谢基因工程研究进行概述与展望.     

一株新的a-淀粉酶抑制剂生产菌株ZG0656及其产物的发酵、分离、性质与应用

从土壤中分离并筛选得到了一株a-淀粉酶抑制剂生产菌, 编号ZG0656。根据形态特征、培养特征、生理生化特征、细胞壁化学组成特征和16S rDNA全序列相似性比较分析等多相分类方法, 确认菌株ZG0656为天蓝黄链霉菌的新变种, 命名为天蓝黄链霉菌南开变种(Streptomyces coelicoflavus var. nankaiensis)。该菌经10 L发酵罐水平发酵, 发酵液中可积累一定量的a-淀粉酶抑制剂。采用浓缩, 树脂吸附, 凝胶过滤, 减压干燥等方法得到a-淀粉酶抑制剂混合物。该a-淀粉酶抑制剂为含氮的拟低聚糖类物质, 能强烈抑制哺乳动物来源的a-淀粉酶, 对餐后高血糖的形成有明显改善作用, 可用于制备治疗糖尿病、肥胖症的药物或功能性食品。     

少根根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的表达

△6-脂肪酸脱氢酶是一种膜整合蛋白,也是多不饱和脂肪酸合成途径中的限速酶.在前期工作中,通过RT-PCR和RACE技术,从少根根霉NK300037中克隆到一个潜在编码△6-脂肪酸脱氢酶的序列,序列和功能分析结果表明该序列具有一个长度为1377bp、编码由458个氨基酸组成、大小为52kD的新的△6-脂肪酸脱氢酶基因.把少根根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因(RAD6)亚克隆到表达载体pPIC3.5K,构建重组表达载体pPICRAD6,并转化到毕赤酵母菌株GS115进行表达.提取酵母细胞总脂肪酸和进行甲酯化,经气相色谱和气相色谱-质谱连用分析表明,目的基因的编码产物能将C16:1、C17:1、C18:1、亚油酸和α-亚麻酸在△6和7位间特异性脱氢而引入一个新的双键,生成更高不饱和的脂肪酸,该催化反应没有链长特异性,只有键位特异性.此外,按Kozak序列特点,改变目的基因转译起始密码子周边序列结构,并把改变后序列导入毕赤酵母GS115中进行功能表达分析,结果表明在毕赤酵母中这种改变同样能提高目的基因的表达水平.综合所有分析结果表明,巴斯德毕赤酵母更适合用来综合分析△6-脂肪酸脱氢酶基因的功能.     

γ—亚麻酸生产菌深黄被孢霉原生质体的形成和再生

采用2％的溶壁酶加4％的蜗牛酶,从深黄被孢霉的菌丝中获得了大量的原生质体。同时对菌丝的培养时间、渗透压稳定剂、酶解系统和酶解温度等因素进行了系统的观察,从而获得了制备深黄被孢霉原生质体的最适条件。并对该原生质体在高渗培养基上进行了再生实验,其再生率为32％。