去势大鼠阴茎海绵体内CSE/H2S与HO-2/CO的交叉调控作用

摘要：目的 观察去势大鼠阴茎海绵体胱硫醚γ裂解酶（cystathionine-γ-lyase,CSE）/硫化氢（Hydrogen sulphide,H2S）与血红素加氧酶2（heme oxygenase,HO-2）/一氧化碳（carbon monoxide,CO）的交叉调控作用,初步探讨勃起功能障碍的发病机制。方法 雄性SD大鼠制备去势大鼠模型,分别施加锌原卟啉（ZnPP,HO阻断剂）和炔丙基甘氨酸（PAG,CSE阻断剂）干预,检测基础条件下和阿扑吗啡（Apomorphine,APO）刺激后的海绵体内压（Intracavernous pressure,ICP）和勃起率;通过Western-blot、敏感硫电极和分光光度计分别检测大鼠勃起不同时期ZnPP（HO阻断剂)对CSE/H2S系统的影响,PAG（CSE阻断剂）对HO-2/CO系统的影响。结果 基础条件和APO刺激后去势组、去势PAG组和ZnPP组与假手术组比较,ICP和勃起率下降（P<0.01）,且去势PAG组和ZnPP组较去势组ICP明显下降（P<0.01）;阿朴吗啡刺激勃起前和勃起中,去势组和去势Znpp（HO阻断剂）组较假手术组CSE蛋白表达和H2S含量下降（P<0.05）,且勃起中去势Znpp组较去势组CSE蛋白表达和H2S含量明显降低（P<0.05）;勃起后去势组和去势Znpp（HO阻断剂）组较假手术组H2S含量下降（P<0.01）。勃起前和勃起中去势组和去势PAG（CSE阻断剂）组较假手术组HO-2蛋白表达和CO含量下降（P<0.05）,且勃起中去势PAG组较去势组HO-2蛋白表达和CO含量明显降低（P<0.05）;勃起后去势组和去势PAG（CSE阻断剂）组较假手术组CO含量下降（P<0.01）。勃起前、勃起中和勃起后,CSE和HO-2蛋白表达分别呈正相关（r=0.732,0.850和0.727）,H2S和CO水平分别呈正相关（r=0.765,0.912和0.929）。结论 CSE/H2S与HO-2/CO交叉调控作用与去势大鼠勃起功能障碍有关。     

广西南垌早石炭世巴平组下段牙形刺新材料

本文系统研究了广西南垌早石炭世巴平组下段丰富的牙形刺,识别出Siphonodella duplicata,S.cooperi,S.obosoleta,S.quadruplicata,S.lobata,S.crenulata,S.sandbergi,S.eurylobata,S.isosticha,Gnathodus delicatus等重要的带化石。首次报道和描述了产自Siphonodella crenulata带下部牙形刺新材料,其中确立一新种:Siphonodella nandongensis sp.nov.Li;一新未定种:Siphonodellasp.nov.A;且修订了Siphonodella trirostrata Druce(1969)的含义。依据上述牙形刺:Siphonodella nandongensis sp.nov.Li;Siphonodellasp.nov.A和Siphonodella trirostrata Druce(1969)发育特征,认为Siphonodella nandongensis sp.nov.Li与Siphonodella sexplicata;Siphonodella sp.nov.A与Siphonodella quadruplicata(Branson et Mehl);Siphonodella trirostrata Druce(1969)与Siphonodella sandbergi Klapper演化关系密切,并确定所描述的化石新材料的层位是Siphonodella crenulata带下部,地质时代为早石炭世早期,为进一步精细地层划分提供了翔实资料。     

烟气脱硝尾液厌氧氨氧化处理中微生物群落结构分析

采用厌氧序批式反应器处理火电厂烟气脱硝尾液并研究厌氧氨氧化微生物群落结构。通过扫描电镜观察发现,优势菌群为椭圆形的球菌且具有下凹的火山口状,直径约为0.7μm。通过污泥总DNA提取、PCR扩增、阳性克隆验证和测序等分子生物学手段得到反应器内菌群16S r RNA基因序列,建立系统发育树和克隆文库。结果表明,在细菌通用引物27F-1 492R PCR扩增的体系中,得到85个克隆子,分为21个OTU,各菌群所占的比例为:变形菌门Proteobacteria:61.18%;酸杆菌门Acidobacteria:17.65%;绿菌门Chlorobi:8.24%;绿弯菌门Chlorofexi:5.88%;芽单胞菌门Gemmatimonadetes:3.53%;硝化螺旋菌门Nitrospirae:2.35%;浮酶状菌门Planctomycetes:1.18%。而在厌氧氨氧化菌特异引物pla46rc-630r;AMX368-AMX820 PCR扩增的体系中有45个克隆子,分为3个OTU,其中Candidatus brocadia sp.占有95.6%,未知菌种4.4%。     

摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶的分离纯化及性质

立体选择性水解2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯(CNDE)是化学-酶法合成重大疾病治疗药物普瑞巴林的关键步骤。分离纯化了能够高效水解S-型CNDE的摩氏摩根菌ZJB-09203胞内酯水解酶,并进行酶学性质研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose 6 FF疏水柱层析、DEAE Sephadex A-50阴离子交换和羟基磷灰石Bio-Scale CHT层析,纯化得到电泳纯的酯水解酶。SDS-PAGE和凝胶过滤HPLC分析确定该酶为单亚基蛋白,分子量为68 kDa。不同碳链长度p-硝基苯酚酯特异性酶解结果表明,该酶为酯酶,酶促合成普瑞巴林手性中间体(S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸的最适pH为9.0,最适温度为45℃,且在pH 7.0-9.0和40℃条件下具有良好的稳定性。Ca2+、Cu2+、Mn2+对酶活有一定的促进作用,Co2+、Fe3+、Ni2+及EDTA对酶活有较强的抑制作用。此外,考察了该酯酶水解p-硝基苯酚酯的动力学参数,及CNDE浓度对转化率的影响。首次报道了能够立体选择性水解CNDE的酯酶,相关酶学性质研究将为该酶催化合成普瑞巴林手性中间体的工业化应用提供重要依据。     

激活补体试验检测静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性的优化

优化激活补体试验的条件,完善静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法。方法采用补体活化经典途径的原理,分别探讨致敏红细胞密度和贮存时间对人免疫球蛋白Fc段生物学活性检测结果的影响;比较手工法和微孔板分光光度法检测Fc段生物学活性的检测结果。结果在致敏红细胞A541 nm=1.3和致敏红细胞贮存5 d时,检测结果较稳定。微孔板分光光度法检测优于手工法。结论完善了人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法,检测结果准确、重复性好。     

Phylogenetic Patterns of the Southeast Asian Tree Frog Chiromantis hansenae in Thailand

Although landscape features such as mountains and rivers are recognized often as limiting factors to amphibian dispersal and gene flow, a limited number of studies have investigated such patterns across Southeast Asia. A perfect example of this is Thailand, located in one of the world＇s biodiversity hotspot regions. Thailand represents the corridor between mainland Asia and the Sunda Shelf, a famous and widely recognized biogeographic region, and yet there are few studies on the genetic structure among populations of amphibian species distributed across Thailand. The Southeast Asian tree frog, Chiromantis hansenae has been reported to possess a geographic range that is restricted to Thailand and, presumably, Cambodia~ Here, we investigate phylogenetic relationships among C. hansenae populations using partial sequences of the mitochondrial 16S rRNA gene and nuclear POMC gene. Our results reveal two distinct evolutionary lineages within C. hansenae populations in Thailand. The genetic divergence among populations between these two clades is considerable, and results support inter-population divergence, and high genetic differentiation （pairwise FsT = 0.97）, between two localities sampled in western Thailand （TK1 and TK2）, separated from each other by 40 kilometers only. The results suggest that landscape features across Thailand may have a profound impact on patterns of diversification in the country, underscoring the urgent need for fine-scale investigations of genetic structure of endemic and ＂widespread＂ species.     

基于响应面设计茎段形成层培养猕猴桃幼苗的优化研究

为降低猕猴桃组培快繁中的污染率,提高其繁殖效率,该文以猕猴桃的幼嫩茎段为外植体,采用两步培养法进行茎段形成层的愈伤及成苗诱导研究,并利用响应面设计软件对NAA浓度、6-BA浓度、低渗处理时间进行了各条件的优化,同时通过组织切片确定愈伤的来源及幼苗的形成方式。结果表明:(1)培养过程中撕除茎段周皮能显著降低污染率,用200～400 mg·L^-1的PVP处理猕猴桃茎段可有效防止去皮茎段的褐化。(2)愈伤诱导的最佳条件为预培养28.3 h、NAA 4.45 mg·L^-1、6-BA 0.28 mg·L^-1,而幼苗形成的最佳条件为预培养26.4 h、NAA 4.84 mg·L^-1、6-BA 0.42 mg·L^-1。这表明形成层愈伤诱导需较长低渗处理时间和较高生长素,而成苗诱导则需较高生长素、激动素及较短的低渗处理时间。(3)组织切片观察结果表明猕猴桃愈伤组织源于形成层干细胞的分裂,且幼苗株源于胚状体的发育。综上结果表明,通过除去猕猴桃嫩茎周皮,外加抗氧化、低渗处理,可有效降低猕猴桃组培快繁中的污染率,提高繁殖系数和胚状体发生率,为猕猴桃种苗的规模化生产提供技术支撑。     

孟加拉虎粪便放线菌的分离及其多样性

【目的】建立有效分离动物粪便放线菌的方法,认识孟加拉虎粪便放线菌的多样性。【方法】从预处理、抑制剂、培养基三个方面考虑,采用平板稀释的分离方法。用细菌通用引物扩增获得放线菌菌株的16SrRNA基因,根据系统发育分析进行鉴定。【结果】孟加拉虎粪便样品中,可培养放线菌的菌落平均数量为1.10×108cfu/g(粪便湿重);对分离到的110株纯培养放线菌的16S rRNA基因部分序列分析表明:它们分布于10个科、12个属,主要是一些菌丝分化程度低的放线菌,如:Arthrobacter、Dietzia、Kocuria、Corynebacterium、Microbacterium等;产丝的放线菌主要以Streptomyces占优势,约占分离到放线菌总数的64%。【结论】干热处理粪便样品可以大大提高放线菌的出菌率;添加多种抑制剂及不含天然成分的组合培养基较适合粪便放线菌的分离;孟加拉虎粪便中可培养放线菌的多样性较丰富。本研究提供的分离动物粪便放线菌的有效方法,为动物粪便放线菌资源的研究和开发利用提供了借鉴作用。     

Phylogenetic position of yeast-like symbiotes from three rice planthoppers (Homoptera: Delphacidae ) based on 18S rDNA and ITS-5.8S rDNA sequences

为研究水稻3种主要害虫灰飞虱Laodelphax striatellus、褐飞虱Nilaparvata lugens和白背飞虱Sogatella furcifera体内类酵母共生菌( yeast-like symbiotes,YLS)的种属地位及与寄主的进化关系,测定了其体内YIS的18SrDNA及ITS-5.8S rDNA的全长序列.基于3种稻飞虱体内YLS的18S rDNA序列比对表明,褐飞虱YLS和白背飞虱YLS的一致性比其与灰飞虱YLs的高(褐飞虱YLS和白背飞虱YLS为98.91％,灰飞虱YLS和褐飞虱YLS为95.74％,灰飞虱YLS和白背飞虱YLS为96.02％),而基于ITS-5.8S rDNA序列比对,灰飞虱YLS和白背飞虱YLS的一致性比其与褐飞虱YLS的要高(白背飞虱YLS和灰飞虱YLS为99.57％,灰飞虱YLS和褐飞虱YIS为91.91％,白背飞虱YLS和褐飞虱YLS为90.46％).基于真菌18S rDNA和ITS-5.8S rDNA的系统发育树均表明,3种稻飞虱体内YLS与其他已知真菌进化关系较远.本研究证实了昆虫真菌类共生菌与寄主形成了长期的进化关系,从而形成了不同于已知真菌的分类地位.     

中国寄生烟粉虱的三种恩角蚜小蜂28S rRNA系统发育分析(英文)

蚜小蜂Bemisia tabaci是烟粉虱的重要天敌, 其中双斑恩蚜小蜂Encarsia bimaculata, 丽蚜小蜂E. formosa以及浅黄恩蚜小蜂E. sophia是国内烟粉虱寄生蜂3个优势种。本研究以采自中国华南、 华东、 华北、 西南地区以及马来西亚、 埃及的E. bimaculata、 E. formosa和E. sophia 3个优势种的8个不同地理种群为研究对象, 对其28S rRNA D2和D3扩展区序列进行了测定和分析。结果表明： Encarsia属的恩蚜小蜂其28S rRNA D2和D3序列在种间水平上高度保守; 与丽蚜小蜂相比, 双斑蚜小蜂与浅黄恩蚜小蜂在遗传关系上更为接近。依据28S rRNA和D2序列的系统发育分析结果显示, 同一种的蚜小蜂其种内也存在一定的遗传分化, 比如中国广东的浅黄恩蚜小蜂种群与澳大利亚、 西班牙、 埃及和埃塞俄比亚的浅黄恩蚜小蜂种群接近, 而与泰国的种群的亲缘关系则较远。在系统发育树上, 来自不同国家的（苏丹、 埃及和危地马拉以及澳大利亚）的双斑蚜小蜂种群聚集在同一分支上; 同时, 来自中国衡水和昆明的丽蚜小蜂种群也与来自美国的丽蚜小蜂种群聚集在一起, 却与埃及的种群相距较远。对造成这种同种寄生蜂不同种群之间在遗传距离和地理距离不对称的原因进行了探讨。