平颏海蛇碱性磷脂酶A_2的融合表达、纯化及活性特征

 将编码平颏海蛇碱性磷脂酶A2 的基因 (PLA2 9)克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pPETTRX的trxA基因的 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 .2 5℃下经IPTG诱导 ,该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达 ,表达量达 2 0 %以上 .利用金属螯合亲和层析和凝胶过滤层析两步纯化 ,得到纯度 85%的融合蛋白 .经肠激酶切割和离子交换柱层析进一步纯化后 ,得到浓度 95%以上的成熟PLA2 9.对重组PLA2 9进行了Western印迹检测 .重组PLA2 9具有与天然PLA2 相近的酶活性 ;并具有对HL60等几种肿瘤细胞的细胞毒作用 ,这在海蛇PLA2 中是首次报道 .平颏海蛇碱性PLA2 融合表达及快速纯化系统的建立 ,为深入开展其结构与功能关系研究奠定了基础     

磷脂酶C—γ2在鼠成纤维细胞株克隆形成中的作用

通过对敲除磷脂酶C－γ1基因的细胞株及其转染磷脂酶C－γ2基因后克隆形成能力的统计学分析揭示出磷脂酶C－γ2有显著的促克隆形成作用,磷脂酶C－γ1作用微小,但与磷脂酶C－γ2有协同作用,提示磷脂酶C－γ2与γ1有功能上有一定的交互性、冗余性,但不可相互取代。     

不同组分羧甲基茯苓多糖（CMP）对HepG2细胞增殖的影响

目的：探究不同组分羧甲基茯苓多糖（CMP）对HepG2细胞增殖的影响。方法：在不同提取碱浓度和碱处理时间下,采用二次加碱法制备不同组分CMP。利用硫酸 蒽酮法、滴定法和CCK 8法对CMP的含量、取代度和HepG2细胞增殖检测。结果：获得7个组分CMP,含量为85%~90 %,取代度为0.65~0.80。不同浓度CMP培养HepG2细胞24 h下,CMP 750 μg/mL抑制细胞增殖效果最好,其中CMP3抑制率最高达50.035 %。CMP 750 μg/mL培养HepG2细胞24、48、72 h,在48 h下抑制效果最好,其中CMP3抑制效果最高达到76.05 %。在72、48、24 h 下CMP3培养HepG2细胞的IC50分别为26.34、34.06、763.64 μg/mL。结论：CMP能有效抑制HepG2肿瘤细胞的增殖,其中CMP3是7个CMP组分中抑制效果最好的,这与CMP3的含量、浓度呈正相关性,48 h为CMP最适抑制时间。     

庚型肝炎病毒E2区cDNA在毕赤酵母中的表达及抗原性鉴定

从含有庚型肝炎病毒(GBVC/HGV)包膜蛋白E2 cDNA(559bp)的质粒pGEX\|E2中,扩增得到能够编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(GST)和GBVC/HGV包膜蛋白E2的融合基因片段。将此长度为1324bp的DNA片段插入到酵母表达载体pPIC9K中,使之位于α因子信号肽下游,且与之同框。通过电激转化将构建的重组表达质粒pPIC9K\|GST\|E2插入到Pichia pastoris GS115菌株染色体中。筛选His\++Mut\+s表型的转化子,震荡培养,用05%甲醇诱导表达5d后,在培养液中得到表达的GSTE2融合蛋白。经过表达条件的优化,GSTE2蛋白可占培养液中总蛋白的50%。通过谷胱甘肽亲和层析柱纯化,GSTE2融合蛋白的纯度可达95%左右。以庚型肝炎病人血清为探针,进行免疫印迹及ELISA实验,结果表明该融合蛋白具有能被庚型肝炎病人血清特异性识别的抗原性。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B基因的克隆和在大肠杆菌中高效表达

利用PCR方法从金黄色葡萄球菌TSTw基因组DNA中扩增出约700bp的DNA片段,将之克隆到pGEM7Zf(+)载体上并转化大肠杆菌 DH5α菌株。重组质粒的测序结果表明克隆到了seb基因,它含有717bp（不包括N端81bp的信号肽编码区）,其核苷酸序列与文献报道完全一致。将其连接于表达载体7ZTS上,转化到大肠杆菌JM109（DE3）内。表达的SEB占总蛋白33.5%。      

Hg~(2+)对苜蓿叶片的毒害效应

研究了Hg2 + 对苜蓿叶片的毒害效应。结果表明 :随着Hg2 + 浓度的增加和处理时间的延长 ,叶绿素含量下降 ,电导度上升 ;低Hg2 + 浓度及短时间处理 ,超氧阴离子自由基 (O·2 )和丙二醛 (MDA)含量增加 ,SOD、POD和CAT等保护酶活性升高 ,表明膜系统受到了伤害 ;高Hg2 +浓度及长时间处理 ,O·2 和MDA含量下降 ,SOD、POD和CAT等保护酶活性降低 ,表明细胞结构和功能受到了不可逆的伤害。     

环境中As（Ⅲ）对小麦萌发的影响及砷毒害防治初探

以NaAsO2模拟As(Ⅲ）污染源,通过小麦萌发试验研究As(Ⅲ)对作物的毒害作用。本研究着重讨论了Ca(H2PO4)2对As(Ⅲ)毒害的防治效果和有效方法。结果表明：Ca(H2PO4)2能有效防治As(Ⅲ)对作物的毒害,通过形态与生理生化指标综合得出以Ca(H2PO4)2防治砷毒害的最佳浓度配比为Cp(v):CAs(Ⅲ)=1-1.33:1。