人血清极低密度脂蛋白体外代谢的研究

本文利用脂蛋白脂肪酶(LPL)在体外研究人血清极低密度脂蛋白(VLDL)的代谢变化,及其与其他脂蛋白的关系。发现在适宜条件下,LPL水解VLDL核中的甘油三酯(TG),释放游离脂肪酸(FFA),同时VLDL浊度变小,透光度增加。反应后产物通过密度梯度超速离心方法分离,发现分解代谢产物在密度为1.020～1.045g/ml之间有新生组分产生,其电泳迁移率增快,着色带增宽。电镜观察这些新组分的颗粒比天然VLDL为小,而比低密度脂蛋白(LDL)为大,并有空泡状不规则脂质体的单层形成,以及一些非球形、具有触角或尾巴状的构形,很可能是脂解后VLDL的过剩表面,是新生高密度脂蛋白(HDL)的前体。这些结果说明人血清VLDL经LPL分解代谢后,其结构,形态和组分均发生了明显的变化。     

过氧化物酶体膜对各种光呼吸代谢物的透性和Percoll对其完整性的影响

利用氧极谱法测定依赖乙醇酸和乙醛酸的氧吸收,利用分光光度计测定转氨酶活性的方法,检查了光呼吸碳代谢中各种中间产物对过氧化物酶体膜的透性,结果表明,O2,乙醇酸,乙醛酸,丝氨酸,天冬氨酸,草酰乙酸,α－酮戊二酸能透过过氧体膜,过氧体膜可能有谷氨酸和NADH进入的屏障,过氧体悬浮液Percoll存在,很快使过氧体膜破坏,Percoll也使羟基丙酮酸还原酶和苹果酸脱氢酶的活性很快降低。     

甘蓝型油菜胞质体大量制备技术的研究

用Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法和吖啶橙（ＡＯ）结合光照处理两种方法,均从甘蓝型油菜下胚轴原生质体制备到胞质体。在２个Ｐｅｒｃｏｌｌ梯度、３００００ｇ（１８０００ｒ／ｍｉｎ）与１２℃离心６０ｍｉｎ的条件下,获得了含胞质体８０％以上的群体;以含８０、１００、１２０ｍｇ／Ｌ ＡＯ的酶液酶解下胚轴原生质体,纯化后分别给以３ｈ、２ｈ、１ｈ光照（光强度：４０００ｌｘ）可使原生质体几乎不能分裂,但保持５ｄ以上的     

质粒提取

这里所介绍的方法已成功地用来提取不同菌株中的各种质粒。一般来说,质粒愈小,效果愈好。因为随着质粒分子量的增加,其性质就愈来愈接近宿主DNA的性质。对于大于25kb的质粒分子,用此方法分离是非常困难的,而且得率较低。然而,通常用于克隆的所有质粒相对来说是较小的,因而此方法可获得良好的结果。     

批量分离玉米活性精细胞方法的某些改进(英)

目前,从玉米花粉中分离活性精细胞时,若用半乳糖作低渗介质,虽然得率较高,但是花费较大;若以蔗糖为介质,花粉胀破率（约50％）与精细胞得率（17％左右）均较低。而且,所用的Percoll不连续密度梯度离心,对于大批量分离操作繁琐。通过4种不同方法对玉米花粉的胀破效果的比较,发现经BKS35温育后再以蔗糖低渗缓冲液处理,花粉胀破率可提高到95％以上。该花粉胀破液经过滤,用30％Percoll溶液离心分离精细胞,得率达23．4％。用这种改进的批量分离方法,6h内可从100g新鲜花粉中获得约1．2×108生活精细胞。它不仅提高了产率,以满足玉米精细胞表膜特异蛋白生化分析的需要,而且还简化了操作,更具有经济节省等优点。     

中国对虾非包涵体型杆状病毒核衣壳的分离纯化

An effective procedure for isolation and purification of nucleocapsids of Penaeus chinensis non-occluded baculovirus (PcNOBV) which has destroyed the Chinese shrimp industry since 1993 was described. Gill, stomach, gut and cuticle epidermis under exoskeleton were excised from cultured P. chinensis diseased with typical white spot syndrome and homogenized in liquid nitrogen with TNE buffer containing PMSF and β-ME. The homogenized mixture was filtered through a 0.45μm millipore filter membrane to remove cell debris and ultracentrifuged to pellet the remaining material.The pellet was suspended in PMTNE buffer and laid onto a handmade CsCl gradient. An obvious viral band was observed in the middle of the gradient. Large amounts of virus nucleocapsids were visualized under electron microscope consistently corresponding to the milk-colored viral band. The viral envelope was all lost after purification. The nucleocapsid was bacilliform averaging 80±13nm×380±24nm in size. The negatively stained PcNOBV nucleocapsids revealed 13-16 conspicuous stripes located periodically perpendicular to the longitudinal axis of the nucleocapsids. Six to seven capsomers of 9 nm in diameter were visualized on each side of the stripe.     

成石前后胆囊粘膜上皮多聚核蛋白体RNA含量变化—胆液糖蛋白和蛋白质增加的机制探讨

胆囊淤泥是胆囊结石的前身。测定胆囊粘膜上皮游离(FPR)和结合多聚核蛋白体(MBPR)的RNA含量及胆液粘液糖蛋白(MGP)的结果表明:胆囊淤泥患者胆囊粘膜合成和分泌MGP明显亢进,MBPR与相应GB中MGP的相关性比较提示此时尚有胆液淤积存在,且FPR的RNA含量也显著增高,提示细胞增殖加快。荧光胺法测定胆液蛋白质的含量发现,胆囊淤泥和胆固醇性结石患者胆囊液GB蛋白质含量显著高于色素性结石患者及“正常”对照,但蛋白质的GB浓度与HB浓度的比值显著低于胆固醇GB/HB比值,且GB中MGP与蛋白质含量呈显著正相关。说明蛋白质含量的增加与GB中过高的MGP阻止胆囊中蛋白质的清除过程有关。成石前GB中MGP和蛋白质含量的同时增高及其机制的确立,对认识及预防体内结石均有意义。     

栽培草莓叶绿体分离与cpDNA的提取方法

以栽培草莓‘红颊’(Fragaria×ananassa Duch.‘Benihoppe’)新鲜幼嫩叶片为材料,利用高盐-低pH的缓冲液结合Percoll密度梯度离心分离纯化叶绿体,再用SDS-蛋白酶K法提取叶绿体DNA(cpDNA)。经荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测,结果表明:该方法分离的草莓叶绿体完整性高,叶绿体DNA质量好,纯度高,能够满足后续基因组测序等实验的基本要求,为草莓属及其他草本植物cpDNA的提取提供参考。     

牛肝干细胞的分离培养与鉴定

该实验旨在分离牛肝干细胞,培养观察其生长特性,为比较医学研究及开发牛肝脏体外研究工具提供实验基础。实验采用改良的离体两步胶原酶灌流法,结合密度梯度离心分离牛肝干细胞,观察细胞形态及生长特性,并利用免疫荧光染色和PCR对牛肝干细胞相关标志物进行鉴定。实验分离的细胞接种48 h开始贴壁分裂,随后呈集落样生长,表现出干细胞的特性,低密度下培养504 h后细胞呈肝细胞样分化。正常接种密度的细胞可传至P3代,HE染色可见细胞均为单核,核浆比大,呈幼稚低分化状态;免疫荧光染色和PCR结果均显示,该细胞表达甲胎蛋白AFP、上皮细胞黏附蛋白(EpCAM)、造血干/祖细胞表面标志CD34、干细胞因子受体蛋白(c-kit)、细胞角蛋白CK18、CK19。结果表明,该研究分离了一种具有明显干细胞特征,并表达成熟肝细胞和胆管上皮细胞表面标志物的牛肝干细胞。     

S79株腮腺炎病毒制备纯化抗原用于诊断试剂的研究

以S79株腮腺炎病毒制备纯抗原,用于制备检测腮腺炎抗体(IgG)的ELISA试剂盒。将腮腺炎病毒S79株培养液用中空纤维超滤器进行浓缩,经PEG沉淀后,采用蔗糖密度梯度离心法纯化抗原;以纯化的S79株腮腺炎病毒为包被抗原,制备成ELISA腮腺炎病毒抗体(IgG)诊断试剂,并与SIGMA同类产品进行比较。结果显示,经纯化的S79株抗原的比活力为412.9HAU/mg,杂蛋白清除率为99.5%。应用纯化的S79株腮腺炎病毒抗原制备的ELISA试剂,与SIGMA试剂比较,敏感度为94.4%,特异度为91.7%,一致性为93.3%。结论,以纯化的S79株腮腺炎病毒为包被抗原,可用于大批量ELISA腮腺炎抗体诊断试剂盒的制备。