不同年龄大鼠大脑皮层神经元胞体与胶质细胞递质氨基酸含量的比较研究

用非连续 Ficoll-蔗糖密度梯度超离心方法分离幼年、成年和老年大鼠大脑皮层的神经元胞体和胶质细胞。观察到以幼年大鼠为材料分离得到的神经元胞体和胶质细胞纯度高;而以成年、老年大鼠为材料分离得到的神经元胞体和胶质细胞则有少量污染。用 Dans 反应-聚酰胺薄膜层析-荧光方法测定神经元胞体和胶质细胞中的 GABA、甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、牛磺酸含量。发现:(1)幼年与成年大鼠神经元胞体的递质氨基酸含量少于胶质细胞中的含量。老年大鼠的这种差异不显著。(2)由幼年到成年,胶质细胞中的牛磺酸含量显著下降,而神经元胞体中的牛磺酸含量无显著变化。(3)由幼年到成年,神经元胞体与胶质细胞中的“抑制性”与“兴奋性”递质氨基酸总量的比值皆下降50%左右。本文讨论了神经元胞体和胶质细胞的分离纯度及这两类细胞的“抑制性”与“兴奋性”递质氨基酸含量比值的年龄特点。     

被子植物生殖细胞与精细胞的分离方法

开花植物精细胞的发育经历一个独特的后减数分裂过程,在此过程中每个花粉母细胞减数分裂的产物——小孢子经不对称有丝分裂产生1个大的营养细胞和1个小的生殖细胞,随后生殖细胞经过正常的有丝分裂产生2个精细胞。近几年,随着高通量组学技术的不断完善,利用组学技术比较分析生殖细胞和精细胞的分子特征、揭示决定精细胞命运与功能以及受精识别的重要分子已成为植物生殖生物学备受关注的课题。开展此项研究的关键是建立能获得大量高纯度的生殖细胞与精细胞分离纯化技术。该文综述了被子植物生殖细胞和精细胞分离方法的主要研究进展,分析了关键方法的特点和要点以及不同方法之间的差异和共性,以期为相关领域的研究人员提供借鉴。     

鸡蛋胚下表层卵黄DNA的提取方法

利用Ficoll-400不连续密度梯度离心将受精和未受精鸡蛋的胚下表层卵黄进行纯化, 显微镜观察表明卵黄球形态良好, 没有胚细胞的存在.然后利用较高浓度的蛋白酶K消化,较长时间的酚抽提,最后提取了DNA. 电泳显示DNA条带清晰.该方法简便快速,从每个鸡蛋的胚下表层卵黄可回收10 ng DNA.     

家兔肝脏LRP蛋白的分离纯化与鉴定

利用家兔LRP蛋白聚集形成蛋白复合物的性质,首先通过两次蔗糖密度梯度离心从家兔肝脏中分离得到LRP粗提液,再利用分子大小差异,使用Sephacryl-1000分子筛层析纯化,SDS-PAGE银染结果显示最终得到了单一电泳条带的家兔LRP蛋白.最后使用LRP单克隆抗体的Western blotting鉴定结果正确.     

Hv古细菌SRP19基因的克隆、表达、重组蛋白的纯化及生物学活性的研究

目的：构建Hv古细菌SRP19蛋白的表达载体pET23d-HvSRP19并在大肠杆菌中表达后进行纯化和研究其生物学活性,为研究SRP循环的分子机制奠定基础。方法：用体外合成的重组DNA技术,先合成具有重叠碱基的10个寡核苷酸短序列,通过拼接,获得Hv SRP19基因全长DNA后,克隆到pET23d载体上。重组质粒在大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中的大量表达产物经Q-Sepharose离子交换层析柱纯化后再用蔗糖密度梯度超速离心法分析其生物学活性。结果：正确构建了pET23d-Hv SRP19表达载体,并在大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中获得良好的表达;成功地纯化了表达产物,纯度达95%;证明了具有SRP19蛋白的生物学活性,能够与Hv SRP RNA相互作用形成SRP19-SRP RNA的复合物。结论：纯化的Hv SRP19蛋白与Hv SRP RNA相互作用所形成的复合物,被认为是启动SRP颗粒形成和功能发挥的开始。     

菠菜叶过氧化物酶体转变甘油酸为丝氨酸的NAD供应

完整的菠菜(Spinacia oleracea L.)叶过氧化物酶体在NAD和丙氨酸存在时,转变甘油酸成为丝氨酶。完整过氧化物酶体的转变速率低于破碎的过氧化物酶体转变速率。反应对NAD是绝对依赖的,对草酰乙酸只是部分依赖。草酰乙酸可以用α-酮戊二酸和天冬氨酸代替。过氧化物酶体膜能缓慢透过NAD/NADH。提出了膜运载体可能参与叶过氧体NAD/NADH的再产生的穿梭系统。     

不连续Ficoll密度梯度法分离家蝇脑突触体

1前言突触体是在神经组织匀浆中断裂又封密的神经末端,它们具有内源性神经末端的基本特点,所以是研究神经化学过程的理想系统。昆虫脑突触体用于研究神经化学是很好的材料,但从哺乳动物脑组织中分离突触体的条件不适合昆虫神经组织。1970年Telford和Matsumura在蜚妹脑中分离突触体的结果不理想’“在昆虫脑突触体制备上两个飞跃性的事件是：1976年Donnellan利用FIColl密度梯度法“‘从麻蝇脑中提取到突触体。其次是1980年,Breer发展的漂浮技术（loatationtechnl－qo一,即用一个nC011梯度12钧（…。）在体积小的离心管中形成均匀变…     

人血浆LDL的分离纯化及兔抗人apoB-100抗体的制备

目的：为分离得到较高纯度的人血载脂蛋白B-100（apoB-100）及制备高效的兔抗人apoB-100抗体。方法：采用两步密度梯度离心分离人血浆得到LDL,产物经6％琼脂糖凝胶（Sepharose-6B）分子筛分离纯化后,再由透析浓缩获得纯化产物即apoB-100,同时用5％聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳鉴定为一条带。用分离纯化得到的apoB-100与完全及不完全福氏佐剂混合,以此作为免疫原经4-3-2—2-1（周）免疫新西兰大白兔,随后心脏取血制备兔抗人apoB-100抗体。结论：分离纯化apoB-100浓度为1．4625mg／ml,制备的兔抗体经免疫双扩散测定其效价为1：32。     

LDL亚组分研究进展

根据低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）颗粒的不均一性,可以利用密度梯度超速离心法和梯度凝胶电泳法将其分成若干亚组分。近年来,对于LDL亚组分分离方法的研究取得了显著进展。除对上述两种基本实验方法进行改进外,有实验室采用Western印迹法对LDL颗粒进行分离。LDL亚组分分离方法的进步,使对LDL亚组分的认识更加深入：LDL亚组分的高度不均一性、氧化易感性及电负性等不同特性与动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）关系密切。LDL亚组分的研究为认识动脉粥样硬化及其相关疾病提供了重要的理论依据。