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31.
痢疾志贺氏毒素B亚单位在大肠杆菌中的高效表达 总被引:2,自引:0,他引:2
本文从痢疾志贺氏Ⅰ型菌W30864的染色体克隆了编码志贺氏毒素(Stx)的基因,表达Stx的基因位于约4.5kb的EcoRl片段内。一系列的生物学试验表明:我们构建的杂种质粒(pMGC001)能产生Stx,产量为亲代株的16倍,克隆株不仅有细胞毒和肠毒作用,而且还有神经毒性。我们又从质粒pMGC001将志贺氏毒素的B亚单位(Stx—B)的基因克隆至表达载体pJLA503,获得了Stx—B在大肠杆菌中的高效表达,Stx—B已被纯化,其特异的多克隆和单克隆抗体也被制备。Westem blot表明它们能与Stx—B进行特异的抗原抗体反应。 相似文献
32.
【目的】建立刺猎蝽属Sclomina 3种的转录组数据库,分析近缘种间转录组表达差异,探讨在转录组水平的种间趋异情况。【方法】采用Illumina HiSeqTM4000高通量测序平台进行刺猎蝽属齿缘刺猎蝽S.erinacea、兴仁刺猎蝽S.xingrensis和广西刺猎蝽S.guangxiensis 3种转录组测序;利用Nr, Swiss-Prot, COG/KOG和KEGG数据库进行基因功能注释;对种间差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs)进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。【结果】齿缘刺猎蝽、兴仁刺猎蝽和广西刺猎蝽转录组测序组装获得42 215个unigenes。21 117个基因在上述4个数据库中得到注释(各数据库注释基因数为:Nr, 20 522; Swiss-Prot, 15 550; COG/KOG, 13 969; KEGG,10 850)。兴仁刺猎蝽vs齿缘刺猎蝽转录组有3 390个DEGs (803个上调,2 587个下调),兴仁刺猎蝽vs广西刺猎蝽转录组有12 543个DEGs (6 63... 相似文献
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猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)是在世界范围内与严重腹泻疾病相关的主要肠道病原体,是新生仔猪肠炎和腹泻致死的重要原因之一。为了深入了解猪轮状病毒感染肠道后其致病机制以及引起宿主的抗病毒和修复机制,我们分别饲喂培养基和猪轮状病毒病毒液5d后,采取5 d、10 d、15 d、20 d、25 d小鼠空肠组织进行高通量转录组测序分析。利用基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析差异表达基因(Differentially Expressed Gene,DEGs),选取部分差异表达基因,进行qRT-PCR验证。结果显示,与对照组相比,5个时间段上调DEGs有849个,下调DEGs有824个。对DEGs进行5个功能富集,有共同差异基因15个。这些差异表达基因广泛参与脂质合成与代谢、免疫、细胞增殖、细胞凋亡等活动,主要注释到PPAR、NOD-like、IL-17等信号通路中。qRT-PCR验证上皮细胞增殖相关基因PBLD、C... 相似文献
36.
对虎杖R2R3-MYB转录因子PcMYB2进行转录活性鉴定和表达特性分析,并在转基因拟南芥和转基因毛状根中进行功能研究。利用酵母单杂交试验分析PcMYB2的转录活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测虎杖中PcMYB2的表达模式;DMACA法检测PcMYB2转基因拟南芥和虎杖毛状根中的原花青素含量。酵母单杂试验表明,PcMYB2具有转录激活活性;RTqPCR结果显示,PcMYB2在虎杖根、茎、叶中均有表达,在叶中表达量最高,并且ABA和H2O2外源处理可诱导叶片中PcMYB2的表达;与野生型拟南芥相比,转基因拟南芥种皮颜色加深,原花青素含量为野生型的1.8倍;与野生型毛状根相比,转基因毛状根DMACA染色更深,原花青素含量为野生型的2.3倍。PcMYB2具有转录激活活性,且促进植物原花青素的生物合成。 相似文献
37.
应用基因重组技术,把编码EB病毒早期蛋白BCRF1基因重组于真核表达载体pSG5中,并使该基因在乳地鼠肾(BHK)传代细胞中获得良好表达,表达率为0.5%,血清学实验证实,鼻咽癌,类风湿性关节病人和正常人血清中均不同程度地含有IgG/BCRF1抗体,抗体阳性率分别主92%,86%和77%,几何平均滴度(GMT)分别是:1:16.35,1:14.72和1:10.15。两组病人和正常人血清中IgA/B 相似文献
38.
采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用20ug/ml植物血球凝集素(PHA)和500U/ml重组人白细胞介素2(IL-2)联合刺激人胎儿胸腺细胞,从中提取总RNA,经反转录PCR获得了人胸腺素α原cDNA;将之克隆入pUC19中,序列测定表明与已报道序列一致,进一步将之亚克隆入原核表达载体pBV220,转化大肠杆菌DH5a.观察到在不改变氨基酸编码的前提下,增加胸腺素a原上游引物中A、T含量,可以明显提高胸腺素α原的表达量,同时,不同培养基对它的表达也有影响。胸腺素α原在大肠杆菌中以可溶形式表达,不需复性。初步活性测定显示,它可明显刺激人外周血淋巴细胞E-玫瑰花结形成率。重组人胸腺素α原在大肠杆菌中表达,为其临床应用及基础研究奠定了基础。 相似文献
39.
特异性的肺表面活性物质相关蛋白(SP)包括亲水性的SP-A、SP-D和疏水性的SP-B、SP-C。它们的表达与合成受众多生理、病理因素影响。本文综述了该领域的研究进展。1.SP表达的组织细胞特异性调控:只有肺内某些细胞(肺泡11型细胞、Clara细胞等)能合分泌SP,这可能是由SP基因中特定序列决定的,如SP-B基因的细胞特异性表达的调控成分。2.SP表达的发育期调控:SP基因属发育控制基因家族。在人类妊娠前3mon胎肺中,SP基本不表达:妊娠15-18wk时,气管、支气管上皮细胞即可见SP-B、SP-CmRNAs和表达蛋白,它们可能比SP-A出现早:妊娠19-20wk时可见SP-AmRNA和表达蛋白,胎肺组织在体外无激素条件下培养可很快诱导SP表达,在妊娠后3mon内,各SPmRNAs及表达蛋白水平与磷脂水平平行升高,也与SP降低表面张力的特性逐渐增强相关,羊水中可检出这些蛋白,板层体的出现与SP-B的表达密切相关,而比SP-A的表达早,胎肺发育过程中SPmRNAs增加至少部分是由于其基因转录率升高,可能同时也与翻译增加有关。3.糖皮质激素对SP表达的调控:糖皮质激素对SP-A表达的调控极复杂,且与剂量、发育期、作用时间及动物种属有关,总的来讲,在胎肺移植培养中,激素浓度≤10nmol/L时,能刺激SP-AmRNA和蛋白表达增强;浓度≥1μmol/L,则抑制其表达,在成人肺腺癌细胞系H820中也有这种对糖皮质激素的双相反应。地塞米松能刺激人胎肺移植培养和H820、H441细胞系中SP-B和SP-CmRNAs表达增强。给孕26d母兔倍他米松,可使胎兔肺内SP-BmRNA水平升高接近成年兔水平,但SP-CmRNA则明显降低。4.其它调控SP表达的因素:在人和兔胎肺移植培养中,cAMP及其类似物二丁酰基cAMP、8-溴cAMP和2-溴cAMP均可刺激SP-AmRNA和蛋白表达增加。ATP和cAMP均能刺激离体灌注大翻译效率或翻译后因素的改变可能参与了ATP和cAMP所致SP-A合成的增加。表皮生长因子和干扰素γ可使人胎肺移植培养中SP-AmRNA和蛋白水平呈剂量依赖性增加。角化细胞生长因子能促进培养的成年大鼠11型细胞中SP-A和SP-BmRNAs表达。转化生长因子能抑制人胎肺移植培养中SP-AmRNA和蛋白的表达,下调培养11型细胞中SP-CmRNA表达。胰岛素可使人胎肺移植培养中SP-A蛋白水平呈剂量依赖性下降,肿瘤坏死因子α可降低人肺腺癌细胞系中SP-A和SP-BmRNAs水平,且有剂量依赖关系。性激素不影响SP表达。总之,SP表达的调控可能是许多因素在不同水平综合作用的结果。 相似文献
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