APP基因启动子区甲基化与冠心病相关性的研究

为了探讨淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)基因甲基化与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CHD)之间的关系,采用甲基化特异性实时定量聚合酶链反应(quantitative methylation-specific PCR, qMSP)检测538名CHD患者及453名正常对照者的APP甲基化修饰水平。结果显示:CHD组的年龄、男性人数、吸烟及糖尿病患者人数均高于对照组(年龄, P=8.0E-08;男性人数, P=7.0E-07;吸烟, P=0.001;糖尿病,P=0.019)。CHD组患者白蛋白水平显著低于对照组(P=0.001),而AST、ALP及γ-GT的水平在CHD组中显著高于对照组(AST, P=3.0E-04; ALP, P=0.001;γ-GT, P=0.018)。在总体样本及男性样本中, APP基因甲基化水平在CHD组显著高于对照组(总体, P=0.026;男性, P=0.025)。在非吸烟CHD患者中, APP基因甲基化水平与狭窄程度呈正比(r=0.076, P=0.046)。在总体CHD伴高血压患者及男性CHD伴高血压患者中, APP基因甲基化水平和狭窄程度呈正比(总体, r=0.096, P=0.029;男性, r=0.135, P=0.019)。年龄分层分析后发现,在年龄≥63岁的男性CHD伴高血压患者中, APP基因甲基化水平与狭窄程度呈正比(r=0.219, P=0.020)。在年龄63岁的不吸烟或非高血压CHD患者中, APP基因甲基化水平与狭窄程度呈负相关(不吸烟, r=-0.223, P=0.008;非高血压,r=-0.216, P=0.010)。在男性CHD患者中, APP基因甲基化水平与年龄呈正相关(r=0.163, P=0.001)。在女性CHD患者中, APP基因甲基化水平与年龄呈负相关(r=-0.192, P=0.015)。在男性正常对照组中, APP基因甲基化水平与年龄呈负相关(r=-0.203, P=0.001)。在女性正常对照组中, APP基因甲基化水平与ApoB、白蛋白及ALT水平呈负相关(r=-0.160, P=0.028; r=-0.151, P=0.036; r=-0.163, P=0.024)。在正常对照组中, APP基因甲基化水平与Lp(a)水平呈正相关(r=0.108, P=0.031)。以上结果初步表明APP基因甲基化水平增高可能和男性CHD患病风险有关。     

限制性酶

核酸限制性内切酶是识别双链DNA中专一序列的酶,主要从原核生物中提取。限制性内切酶可分为三类:第Ⅰ和第Ⅲ类酶在同一旦白中具有修饰作用(甲基化作用)和需要ATP的限制性裂解的活性。这两种酶都识别底物DNA中非甲基化的序列,不过第Ⅰ类酶的作用是随机的,第Ⅲ类酶则切DNA的专一位点。     

异源DNA导入水稻诱发活跃反转子Tos17发生可遗传DNA甲基化变异(英文)

用水稻(OryzasativaL.)内源反转座子Tos17为探针,经Southern杂交在5种含有野生稻(ZizanialatifoliaGriseb.)(菰)DNA片段的水稻渐渗杂交系中检测到了可遗传DNA甲基化变异。在分析的4种甲基化敏感限制性内切酶中,每种酶切都发生了亲本杂交片段的消失和新片段的出现。发生甲基化变异的位点包括对称和不对称的胞嘧啶碱基,也包括腺嘌呤碱基。序列分析表明,与水稻亲本比较,所研究的5种渐渗杂交系在Tos17的2个重要区域(5'-LTR和RT)均未发生序列变异。但甲基化敏感-序列特异性PCR分析证实,每种渐渗杂交系在这2个区域内均发生了广泛的DNA甲基化变异。而且,在2种渐渗杂交系中发现5'-LTR和RT区域的甲基化变异存在协同性。甲基化变异可稳定遗传给后代。因为已有的研究表明,在这5种渐渗杂交系中异源DNA导入均导致了Tos17的激活和转座,因此可以推测DNA甲基化在调控Tos17活性中可能具有一定作用。但反转座子激活和甲基化变异之间的确切关系尚有待进一步研究。     

与生物体发育相关的非编码RNA及其作用机理

非编码RNA是一类没有开放阅读框、不能翻译成为蛋自质的RNA分子。在哺乳动物中,它们主要是指微小RNA、小干扰RNA、PIWI互作RNA和其他一些反义转录本等。它们在生物体内广泛存在,通过RNA干扰、基因沉默、基因印迹和DNA甲基化等机制调控着基因的表达。非编码RNA增加了真核细胞调控网络的复杂性,也为科学地解释一些现象提供了新的途径。     

癌表观遗传调控与癌症治疗

基因功能与表达模式异常是癌症的主要特征.日益增多的研究表明,DNA甲基化(DNAmethylation)、组蛋白修饰(histone modification)、染色质重塑(chromatin remodeling)以及microRNAs 介导的基因沉默等表观遗传调控方式的异常与癌症的发生发展密切相关.阐明癌症发生发展...     

利用甲基化特异性引物高通量检测DNA甲基化

建立一种基于甲基化特异性引物和SAGE技术的高通量DNA甲基化定量检测新方法（MSP-SAGE）,首先利用亚硫酸氢钠对基因组DNA进行处理,使未甲基化的C转变为U,而甲基化的CpG不变.将处理和未处理的DNA双链变性后用随机引物PNNNNCG对存在含有CG的单链进行延伸,而无甲基化CG的单链处则不能延伸;将差异延伸的单链序列和频次信息经过系列分子操作后,引入PCR扩增模板;对中间带有未知序列的PCR扩增产物进行串连克隆测序.将来自于未处理组和处理组的某一CpG位点的序列出现的次数定义为［Tags］A和［Tags］B,将标准系列的实际甲基化水平和［Tags］B/［Tags］A之间建立线性回归方程.根据每一CpG位点的［Tags］B/［Tags］A比值可反推该位点的甲基化水平.MSP-SAGE具有良好的线性,基于标准系列的［Tags］B/［Tags］A与其实际甲基化水平的标准曲线方程为y＝1.455x（R²＝0.984,P<0.01）.MSP-SAGE的回收率在95%到110%之间,精确度位于4.2％和10.5%,检测限在3％左右,单次检测通量可达24个CpG位点.MSP-SAGE是一种很有应用前途的高通量DNA甲基化定量检测方法.     

RNA沉默的结构生物学研究进展

RNA沉默指由长度约为21nt的小RNA介导的特异的基因沉默机制,它控制着许多基本的生命过程,已经成为重要的生物技术手段,在医学上也有巨大的应用价值。近些年对RNA沉默通路中蛋白结构的分析揭示了小RNA加工、运输、修饰和发挥功能过程中大量的分子细节,发现很多RNA沉默蛋白能识别小RNA及其前体分子的特殊分子结构而实现对它们的操作。     

烟曲霉及其渗出物对人中性粒细胞呼吸爆发的影响

目的:探讨烟曲霉及其渗出物(AfD)对肝移植患者和正常人中性粒细胞(PMN)O-2爆发水平的影响,为进一步研究肝移植后患者易感烟曲霉的发生机制奠定基础.方法:用烟曲霉孢子悬液、烟曲霉孢子悬液 烟曲霉渗出物的混合液分别刺激正常人和肝移植后患者的PMN,1.5小时后流式细胞术测定其O-2(超氧阴离子)水平.结果:分离纯化获得的中性粒细胞纯度较高,其比例＞98%,台盼蓝排斥法测活细胞＞98%.相同条件下,孢子悬液、孢子与AfD混合液刺激正常人PMN产生的O-2呼吸爆发水平差异无统计学意义,但二者刺激肝移植患者PMN时,O-2爆发水平有显著差异(P＜0.01)、正常人与患者的PMN所爆发O-2水平有显著差异(P＜0.01).结论:肝移植患者的PMN与混合液所爆发的O-2水平较正常人明显降低,提示这可能与肝移植患者易感烟曲霉菌有一定关系.     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷诱导鼻咽癌细胞株Syk基因启动子去甲基化的研究

利用5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR）处理体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2及永生化非癌性人鼻咽上皮细胞株NP-69,采用BS-PCR、Q-RT-PCR及Westernblot方法分别检测经5μmol/L的5-aza-CdR处理前后,各细胞株中Syk基因启动子甲基化状况及SykmRNA和蛋白质表达情况。探讨去甲基化药物5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对鼻咽癌细胞株中脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）启动子甲基化水平及其表达的影响。结果显示,Syk基因启动子甲基化水平与鼻咽癌细胞分化程度呈负相关,两种鼻咽癌细胞株的Syk mRNA和蛋白质表达水平显著低于NP-69细胞（P〈0.01）;经5-aza-CdR处理后两种鼻咽癌细胞株的Syk基因启动子甲基化水平降低,Syk mRNA及蛋白质表达升高（P〈0.05）;高分化鼻咽癌细胞株对药物敏感性高于低分化鼻咽癌细胞株（P〈0.01）。由此可见,两种鼻咽癌细胞株中存在不同程度的Syk基因启动子甲基化状态,5-aza-CdR能有效逆转鼻咽癌细胞株Syk基因启动子的甲基化状态,升高Syk mRNA及蛋白质表达,同时鼻咽癌细胞分化程度越高恢复Syk基因表达的比率越高。     

14-3-3 proteins--an update

14-3-3 is a highly conserved acidic protein family, composed of seven isoforms in mammals. 14-3-3 protein can interact with over 200 target proteins by phosphoserine-dependent and phosphoserine-independent manners. Little is known about the consequences of these interactions, and thus are the subjects of ongoing studies. 14-3-3 controls cell cycle, cell growth, differentiation, survival, apoptosis, migration and spreading. Recent studies have revealed new mechanisms and new functions of 14-3-3, giving us more insights on this fascinating and complex family of proteins. Of all the seven isoforms, 14-3-3σ seems to be directly involved in human cancer. 14-3-3σ itself is subject to regulation by p53 upon DNA damage and by epigenetic deregulation. Gene silencing of 14-3-3σ by CpG methylation has been found in many human cancer types. This suggests that therapy-targeting 14-3-3σ may be beneficial for future cancer treatment.