靶向Bcl-2克服非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药

摘要 目的：探讨靶向抗凋亡蛋白Bcl-2克服非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的作用及重定位Bcl-2靶向抑制剂用于克服耐药的可行性。方法：通过药物浓度梯度递增法构建非小细胞肺癌多代EGFR-TKIs耐药株,根据亲本细胞和多代EGFR-TKIs耐药的非小细胞肺癌细胞的RNA-seq数据筛选出潜在耐药相关基因Bcl-2,通过Western blot 检测其在耐药细胞中的蛋白水平。为了探讨Bcl-2诱导耐药的作用,采用siRNA干扰和使用Bcl-2的抑制剂ABT199抑制Bcl-2,通过CCK8法、IncuCyte实时监测和Western blot等方法检测其对亲本和耐药细胞的细胞活力、药物敏感性、增殖和凋亡的影响。随后使用奥希替尼分别处理亲本及耐药细胞,通过Western Blot检测NRF2受到药物作用后及在耐药细胞中的蛋白水平,并以临床公共数据库分析辅助验证。使用siRNA干扰或NRF2抑制剂ML385敲低或抑制NRF2功能,借助Western Blot和CCK8法检测其对Bcl-2表达水平及对EGFR-TKI敏感性的影响;通过加入NRF2的激动剂Ki696探究其对Bcl-2的诱导作用、对EGFR-TKI敏感性的影响及取消靶向Bcl-2逆转耐药的作用。结果：Bcl-2在EGFR-TKIs耐药细胞中上调;敲低或抑制Bcl-2后,可选择性抑制耐药细胞的生长和活力,并诱导凋亡,且能逆转包括第三代药物奥希替尼在内的多代EGFR-TKIs耐药;EGFR-TKI可在敏感细胞中诱导NRF2的上调,且耐药细胞中上调的Bcl-2受NRF2调控。结论：EGFR-TKIs耐药细胞通过上调抗凋亡分子Bcl-2获得耐药,该分子的上调受NRF2的调控,靶向Bcl-2则可以逆转耐药。     

玉米根微粒体ABA结合蛋白的性质及逆境胁迫的影响

以玉米根微粒体为材料进行的微量放射配体结合（ＭＲＬＢ）实验表明玉米根微粒体膜上存在着ＡＢＡ结合位点,ＡＢＡ与ＡＢＡ结合蛋白（ＡＢＡ－ＢＰ）结合的最适ｐＨ为６．５,结合反应对温度（０℃和２５℃）不太敏感,ＡＢＡ与ＡＢＡ－ＢＰ的结合反应是一个动态平衡过程,５ｍｉｎ即可达最大结合（Ｂｍａｘ）的５０％,３０ｍｉｎ达到最大结合,１ｈ内基本保持不变。胰蛋白酶处理表明此结合位点为蛋白质,冻融实验则表明此蛋白与ＡＢＡ的结合不仅要求其自身具有特定构象而且需要有一定的膜脂环境,ＤＴＴ处理实验结果显示ＡＢＡ－ＢＰ中可能存在着二硫键。逆境处理可以提高玉米根微粒体膜对ＡＢＡ的结合活性,盐胁迫、渗透胁迫、干旱胁迫和热冲激处理分别使结合活性上升３４．９％、１７．８％、２３．１％和１３．３％。     

肿瘤坏死因子α对白血病细胞作用的^31P核磁共振研究

木文用３１Ｐ核磁共振（ＮＭＥ）观察了人淋巴瘤白血病细胞系Ｍｏｌｔ－４和人早幼粒白血病细胞系ＨＬ－６０的细胞代谢。Ｍｏｌｔ－４和ＨＬ－６０细胞系的３１Ｐ谱主要由磷酸单酯、无机磷（Ｐｉ）、双磷酸双酯、ＡＴＰ的共振峰组成。３１Ｐ谱显示Ｍｏｌｔ－４细胞在受肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）作用后,ＡＴＰ／Ｐｉ比值降低。ＨＬ－６０细胞在受ＴＮＦ－α作用后,ＡＴＰ减少。３１Ｐ－ＮＭＲ提供了一种非损伤性研究细胞代谢的重要方法。     

人体β-珠蛋白基因5’旁侧调控元件与不同发育时期调控因子的相互作用

人β-珠蛋白基因主要在成年期的骨髓中表达,在胎儿肝,成年肝和K 562细胞中则处于关闭状态。凝胶电泳阻抑法分析发现,在人胎儿肝,成年肝及K 562细胞的核蛋白抽提物中存在着不同的与β-珠蛋白基因5'旁侧调控元件(-372到-194 bp)相结合的红系组织特异性的调控因子。竟争试验的结果表明,成年肝和K 562细胞中的调控因子与β-珠蛋白基因5'旁侧调控元件相互作用的方式具有一定的相似性,这两种细胞的调控因子既结合于负调控区(NCR 2)也结合于正调控区,说明两种细胞中β-珠蛋白基因的关闭机制可能是相似的。胎儿肝的核蛋白因子只结合于负调控区,推测在胎儿期存在独特的关闭机制。     

铁效应元件结合蛋白2的特性

铁效应元件结合蛋白２的特性李昕权,郑敏（华西医科大学附属二院血液研究室,成都６１００４１）关键词铁效应元件结合蛋白２铁效应元件结合蛋白（ｉｒｏｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＩＲＥ－ＢＰ）在细胞内铁代谢平衡的转录后调...     

蛋白质N端豆蔻酰化修饰的基因工程表达偶联加工系统

对酵母ＮＭＴ基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究,进而构建了复制子为ｐ１５Ａ并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒ｐＫＺＭＴ,将其与表达质粒ｐＣＺｍＣα１共转化进大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｆ′,进行双质粒表达偶联加工修饰研究,其中ｐＣＺｍＣα１表达底物蛋白小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶催化亚基α（ＰＫＡ-ｍＣα）。ＳＤＳＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明,双质粒表达系统中,ＰＫＡ-ｍＣα都得到了稳定的高表达,尤其在２３℃低温诱导表达时,表达产物的可溶性部分明显增多;而酵母ＮＭＴ被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。［^３Ｈ］ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｉｄ标记测定及放射自显影的结果显示,在大肠杆菌中表达的重组ＰＫＡ-ｍＣα被豆蔻酰化修饰。     

真核生物转录因子对DNA序列的识别

真核生物转录因子对ＤＮＡ序列的识别杨岐生（浙江大学生物科学与技术系,杭州３１００２７）关键词真核生物转录因子,蛋白质－ＤＮＡ识别研究蛋白质和ＤＮＡ两类生物大分子的相互作用,以阐明基因表达、调控及信息传递的分子机制,是认识生命活动本质的核心问题。本文介...     

甘露聚糖结合蛋白选择性糖识别的分子机制

甘露聚糖结合蛋白选择性糖识别的分子机制陈政良（广州第一军医大学免疫学教研室,广州５１０５１５）关键词甘露聚糖结合蛋白,糖识别甘露聚糖结合蛋白（ｍａｎｎａｎ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＭＢＰ）是一种血浆蛋白,因被发现能选择性识别并结合酵母菌外壁上的...     

六种鼠苹果酸脱氢酶,血浆蛋白质和血红蛋白的变异分析

本文分析了家鼠属（Ｒａｔｔｕｓ）４种鼠和姬鼠属（Ａｐｏｄｅｍｕｓ）２种鼠的苹果酸脱氢酶、血浆中β１区和β２区蛋白质、血浆清蛋白、前清蛋白以及红细胞中血红蛋白的变异。结果表明,ＭＤＨ在进化上是比较保守的,其中ＭＤＨｍ和ＭＤＨｓ２带在各鼠间位于同一泳动线上,仅ＭＤＨｓ１带的泳动速度出现属间和种间的微小差异;血浆中β１区和β２区的蛋白质带、清蛋白带以及前清蛋白带各鼠间出现明显的变异,表现为黑线姬鼠和社鼠在β１区出现２种多态型区带,褐家鼠在β２区也有２种多态型带;各鼠间的血红蛋白变异比较明显,主要表现在区带数和主成分的泳动度显著不同,而且社鼠的Ｈｂ出现３种多态型,黄毛鼠出现２种多态型,其余各鼠的Ｈｂ皆为单态性。上述１６项生化特性按相似和相异进行配对比较,初步表明黄毛鼠与褐家鼠亲缘上比较相近,白腹巨鼠要比其他３种鼠亲缘上更接近于黑线姬鼠,而社鼠与白腹巨鼠之间进化分歧相对地较大。