灰麝Ju的种群数量变动

汇集了1989-1996年云南保山市坝区的调查资料和其它地区的文献资料,对灰麝Ju和群数量变动进行了分析。灰麝Ju集中分布于海拔1650m的保山市坝区,具有较强的区域性和海拔高度的局限性特征,种群相对数量高峰分别出现在6月和8-12月,灰麝Ju的年变动在保山坝区居民区鼠型小兽群落中组成相对稳定。     

雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎差异表达基因的呈现

构建了雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎间的抑制性差减杂交cDNA质粒文库。对原肠期’739个和尾芽期816个PCR阳性克隆进行斑点杂交,得到72个原肠期和98个尾芽期斑点杂交阳性克隆。测序和基因数据库比对结果表明：72个原肠期斑点杂交阳性克隆中,包括19个已知基因的cDNA片段和31个没有同源性的cDNA片段;98个尾芽期斑点杂交阳性克隆中,包括52个已知基因的cDNA片段和37个没有同源性的cDNA片段。采用虚拟Northern杂交和RT-PCR证实了部分基因在银鲫胚胎发育过程中的差异表达。这些差异表达基因的呈现为进一步研究银鲫胚胎发育的分子机制奠定了基础。     

银鲫精巢特异的Ly-6/uPAR相关蛋白的分子克隆及其特征分析

Ly-6/uPAR基因超家族(Ly-6 SF)成员广泛地存在于后生动物中, 开展该家族相关功能基因研究具有重要的意义。研究从银鲫(Carassius auratus gibelio)中鉴定到一个该家族新成员, cDNA全长为570 bp, 其中开放阅读框长度为300 bp, 编码99个氨基酸, 生物软件预测该蛋白含有一个LU结构域, 不含GPI锚信号序列, N端含有信号肽, 表明其可能为Ly-6基因超家族中分泌型蛋白。组织表达分析显示, 该基因只在银鲫精巢中特异表达, 且又是Ly-6基因超家族中一员, 因此将其命名为银鲫精巢特异的Ly-6/uPAR相关蛋白(Carassius auratus gibelio testis-specific Ly-6/uPAR related protein, 简称CagTslurp)。原位杂交结果显示, 该基因在银鲫精巢的精原细胞, 初级精母细胞以及次级精母细胞中表达, 精子细胞中存在少量的表达, 而在体细胞中不表达。这种精巢特异的表达模式, 暗示CagTslurp在银鲫精子发生中可能发挥了作用。       

银鲫卵母细胞体外诱导成熟技术的建立

研究以银鲫为材料, 根据银鲫(Carassius auratus gibelio)卵母细胞生发泡(Germinal vesicle, GV)边移程度及剥离GV中减数分裂前期染色体的凝集状态, 将银鲫Ⅳ时相的卵母细胞分为GV0、GV1、GV2和GV3四个时期; 并进一步比较了分别处于这4个时期银鲫卵母细胞体外诱导培养的成熟率、卵裂率和孵化率。结果表明, GV1期之后的卵母细胞均可有效进行体外诱导成熟, 可正常受精发育, 由于GV1期卵母细胞有较长时间用于显微操作, 因此GV1期卵母细胞被选为进行体外诱导的最早时期的卵母细胞。以GV1期卵母细胞为研究材料, 摸索了银鲫卵母细胞体外诱导成熟的适宜条件: 取GV1期的Ⅳ时相卵母细胞, 放置于pH 8.5、加有1 μg/mL孕酮激素(17α, 20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one, DHP)的格氏平衡盐溶液(Gey’s balanced salt solution, GBSS)中, 在23℃培养箱中体外诱导12h后, 将滤泡膜剥离后再进行人工体外授精, 其所获胚胎的孵化率可达55.5%。此外, 将体外转录合成的带GFP标签的h2af1o mRNA注射到GV1期卵母细胞, 发现经显微操作和体外诱导后不仅可以通过GFP绿色荧光信号活体观察GVBD、受精、卵裂和早期胚胎发育的全过程, 而且诱导成熟的卵子仍可正常受精和胚胎发育。研究建立的银鲫卵母细胞体外诱导成熟技术为银鲫和其他鱼类卵母细胞发育过程研究及其相关基因和细胞显微操作提供了技术平台。     

洞庭青鲫肌肉营养成分分析及营养价值评定

对2002年在湖南澧县澧水尾闾、洞庭湖区边缘化的封闭型湖泊——北民湖发现的洞庭青鲫(Carassius auratus var.dongtingking)(n=15)的含肉率和肌肉中的生化成分、比能值及氨基酸测定分析。结果表明,洞庭青鲫的含肉率为52.18%;其肌肉生化成分(鲜重百分比)为:水分78.14%,蛋白质18.63%,脂肪1.51%,灰分1.22%,比能值5.09kJ/g及E/P值27.32kJ/g。肌肉中含有17种氨基酸,总量为866.12mg/g(干重比);其中9种人体必需氨基酸含量占氨基酸总量的48.21%(盐酸水解法);支/芳值达2.81,接近人体正常所需;4种鲜味氨基酸占氨基酸总量的50.39%。根据氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS)标准,洞庭青鲫的第一限制因子是甲硫氨酸和胱氨酸,其次是缬氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。即洞庭青鲫氨基酸含量与组成与彭泽鲫(C.a.var.pengze)、异育银鲫(C.a.var.allogynogeneticrp)、萍乡肉红鲫(C.a.var.pingxing red)相比,均存在差异。     

彭泽鲫两个雌核发育克隆的 RAPD分析

采用随机扩增多态DNA技术,对彭泽鲫种群内两个不同雌核发育克隆进行比较分析.在使用的30个随机引物中有28个引物的扩增效果良好,两个克隆各5个样本共产生清晰可辨的扩增带2154条(其中克隆H为1088条,克隆L为1066条).克隆H群体内的平均遗传距离为0.018070±0.015489,克隆L群体内的平均遗传距离为0.017827±0.015203,两个克隆群体间的平均遗传距离为0.352511±0.009692,群体内和群体间的遗传距离清晰地表明了同一雌核发育克隆群体的遗传相似性和不同克隆群体间的遗传异质性.由NJ聚类法构建的分支树状图也很好地反映了两个雌核发育克隆群体及个体间的相互关系.在28个引物对两个克隆的扩增带中,一共可找到91条多态性片段,一些引物如Opj15、Opp8、Opq11和Opq14等,产生了非常丰富、稳定的多态性标记,可以作为两个雌核发育克隆的有效鉴别指标.彭泽鲫两个雌核发育克隆在分子水平上的差异进一步证实了彭泽鲫种群的遗传多样性,与银鲫相类似,彭泽鲫种群的遗传多样性对单性脊椎动物的进化理论研究和彭泽鲫的选种育种实践都具有重要的意义.     

实验红鲫C1HD系的生化遗传标记

目的 建立实验红鲫C1HD系生化遗传标记.方法 采用聚丙烯酰胺梯度凝胶垂直电泳法,分析实验红鲫C1HD系与普通红鲫的苹果酸脱氢酶(MDH)和超氧化物歧化酶(SOD)等同工酶.结果 实验红鲫C1HD系和普通红鲫血清蛋白电泳可分离出25条以上蛋白带,分为A、B、C等3个区段.在A、B区段,实验红鲫C1HD系分别具有SP-A1谱带和SP-B1、SP-B3～8谱带,但缺少SP-A2、SP-A3和SP-B2谱带.实验红鲫C1HD系具有8条SOD同工酶电泳谱带,比普通红鲫多出SOD-3、SOD-8两条特征带.两种红鲫均具备MDH-1、MDH-2和MDH-3电泳谱带,且带型一致;普通红鲫额外具备MDH-4和MDH-5两条电泳谱带.结论 血清蛋白SP-A1和超氧化物歧化酶SOD-3、SOD-8电泳谱带可以作为实验红鲫C1HD系的生化遗传标记.     

银鲫两个雌核发育克隆间两性生殖子代的遗传多样性分析

Based on the discovery of gonochoristic reproductive mode in silver crucian carp (Carassius auratus gibelio), 18 individuals from the mated offspring between clone F and clone D and their parents were analyzed using 11 RAPD primers. The mated offspring differentiated into three phenotypes. One phenotype is similar to that of clone F (SF). The second is similar to that of clone D (SD). The third shows a novel longer and thinner body type (NL). Electrophoretogram results show abundant polymorhic DNA fragments among individuals in the FD mated offspring. Obviously, the polymorphic DNA fragments originate from the genome recombination owing to the gonochoristic reproductive mode. The FD mated offspring amplify different fingerprints from maternal, and their fingerprints are different from each other. These different DNA fragments can be divided into four groups according to their origin. The average genetic distance among individuals from the FD offspring (0.23 +/- 0.123) is much higher than that of allogynogenetic offspring, which is only about 0.01. Of the three phenotypes in the FD offspring, the average distances among SD is the highest (0.235 +/- 0.097). The next is SF phenotype, in which the average distances is 0.148 +/- 0.073. The average distances among NL is the lowest (0.094 +/- 0.083). The gonochoristic reproductive mode introduces high genotypic variability and underlines genetic diversity. A dendrogram was constructed by NJTREE cluster analysis based on a total of 2320 distinguishable fragments (116 per individual). NL3 and maternal are most closely related, and SD3 and paternal are most closely related. The average genetic distances between SD and SF or NL (> 0.31) is higher than that of between SF and NL (0.124). Consistent with previous study, the genetic distance between maternal and paternal is 0.35. The average genetic distances between FD offspring and parents are both about 0. 32. But the similarities among the three phenotypes in mated group FD offspring and parents are different. The similarity between SF and maternal (71%) is higher than similarities among other phenotypes and maternal. The similarity between SD and paternal (70%) is higher than similarities among other phenotypes and paternal. The results suggest the similarities among three phenotypes in the FD offspring and parents are related with their phenotypes because some DNA fragments specific for phenotypes were amplified in this study. The revelation about reproductive diversity will be able to open the door in which complicated mechanism has been locked in unisexual organisms for long time, and establish the important roles of silver crucian carp in the studies on evolutionary genetics in unisexual or polyploid vertebrates.     

日本产和中国产中华细鲫的RAPD分析

使用20个随机引物对日本和中国辽宁产中华细鲫、日本产Hemigrammocypris sp.和中国产衡有Ju鲫各个4个个体的随机扩增,得到了大量DNA多芯片段。通过Rapdplot程序将DNA的多态片段转换成遗传距离(d=1-S,S=2NxNy/Nx Ny）。该遗传距离的矩阵经Phylip软件包中Neighbor程序计算,生成了四个物种的相互关系分支图。从图中可以看出,分布于日本和中华细鲫有较近的遗传距离,然后是Hemigrammocypris,最后是稀的Ju鲫。该结果说明分布于日本和中国的中华细鲫是同一个物种。日本的Hemigrammocypris是一个独立的物种。