不同饵料对稀有鳇鲫仔稚鱼生长、消化道及消化酶的影响

为了筛选稀有逗鲫(Gobiocypris rarus)仔稚鱼期合适的饵料, 将初孵仔鱼随机分为3个组: 活饵组、饲料组、转食组, 每组3个平行, 均从3 dah(day after hatching)开始投喂相应饵料, 在10、15、20、25、30、35 dah时统计生长指标和存活率, 并进行35 dah仔稚鱼消化道组织学及消化酶活性研究。结果显示: (1)35 dah时, 活饵组存活率最高; (2)从15 dah开始, 活饵组表现出最好的生长性能, 并维持这种趋势; (3)活饵组的消化道各部肌层厚度、黏液细胞数目均最高, 提示该组仔稚鱼消化道发育状态较好, 并具有较优的消化吸收能力; (4)转食组胰蛋白酶活性显著高于活饵组和饲料组。研究结果提示: 相对于饲料和转食, 一直投喂活饵更有利于稀有逗鲫仔稚鱼的生长和发育。建议在标准化养殖过程中, 对仔稚鱼期的稀有逗鲫采取活饵投喂的方式。     

广东雌核发育鲫鱼的生物学及养殖试验的初步研究

迄今为止,关于银鲫是天然雌核发育的鱼类已由许多学者所证实。然而,生活在广东省翁源县等地的“缩骨鲫”(与淡水中习见的鲫鱼体型及生活生殖方式均不一样)。目前仅有过一般报道。       

银鲫卵母细胞体外诱导成熟技术的建立

研究以银鲫为材料, 根据银鲫(Carassius auratus gibelio)卵母细胞生发泡(Germinal vesicle, GV)边移程度及剥离GV中减数分裂前期染色体的凝集状态, 将银鲫Ⅳ时相的卵母细胞分为GV0、GV1、GV2和GV3四个时期; 并进一步比较了分别处于这4个时期银鲫卵母细胞体外诱导培养的成熟率、卵裂率和孵化率。结果表明, GV1期之后的卵母细胞均可有效进行体外诱导成熟, 可正常受精发育, 由于GV1期卵母细胞有较长时间用于显微操作, 因此GV1期卵母细胞被选为进行体外诱导的最早时期的卵母细胞。以GV1期卵母细胞为研究材料, 摸索了银鲫卵母细胞体外诱导成熟的适宜条件: 取GV1期的Ⅳ时相卵母细胞, 放置于pH 8.5、加有1 μg/mL孕酮激素(17α, 20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one, DHP)的格氏平衡盐溶液(Gey’s balanced salt solution, GBSS)中, 在23℃培养箱中体外诱导12h后, 将滤泡膜剥离后再进行人工体外授精, 其所获胚胎的孵化率可达55.5%。此外, 将体外转录合成的带GFP标签的h2af1o mRNA注射到GV1期卵母细胞, 发现经显微操作和体外诱导后不仅可以通过GFP绿色荧光信号活体观察GVBD、受精、卵裂和早期胚胎发育的全过程, 而且诱导成熟的卵子仍可正常受精和胚胎发育。研究建立的银鲫卵母细胞体外诱导成熟技术为银鲫和其他鱼类卵母细胞发育过程研究及其相关基因和细胞显微操作提供了技术平台。     

鲢,鳙,银鲫和团头鲂肠道内分泌细胞中3种肽激素的免疫组化研究

应用ＡＢＣ免疫组化技术,用抑胃多肽、５－羟色胺和内啡肽３种哺乳动物抗血清对鲢、鳙、银鲫和团头鲂的肠粘膜中内分泌细胞进行了检测。结果４种鱼的肠粘膜中均有抑胃多肽免疫反应内分泌细胞存在,但未发现５－羟色胺和内啡肽的免疫反应。抑胃多肽免疫反应内分泌细胞主要分布在前肠前段,并单个地散布在肠褶顶部上皮细胞与杯状细胞之间,多呈长梭形。本文比较了不同食性鱼类和其他动物肠道抑胃多肽免疫反应内分泌细胞的分布规律,讨论了用５－羟色胺和内啡肽免疫染色的结果。     

三倍体湘云鲫3个Sox基因保守区的序列分析

SOX/Sox基因家族成员的主要特征是具有一个HMG(high mobility group)保守盒,其编码的蛋白质可以和DNA序列特异性结合,是一类重要的转录调控因子1,在个体发育过程中SOX/Sox基因对性别分化和组织器官形成起着重要作用。SOX/Sox基因的研究不仅可以揭示性别分化和胚胎发育的机制,而且可为某些遗传疾病的诊断和治疗提供分子方面的资料,因而有着非常重要的理论和应用价值。       

彩鲫Ran基因全长cDNA的克隆及其组织表达特异性分析

根据Ran的保守区序列设计简并引物,结合SMART、cDNA合成及RACE-PCR技术,克隆到彩鲫(Carassius auratus color variety)的Ran基因的cDNA全长,其编码区全长为648bp,编码215个氨基酸。采用BIAST程序在NCBI数据库中对其进行同源基因搜索,结果表明,其推测的编码氨基酸序列与斑马鱼和鲑鱼的Ran基因编码的氨基酸序列的同源性分别高达98％和97％。还对其编码区全长序列进行了原核表达,以经纯化的表达蛋白免疫家兔,制备出了具有较高特异性的多克隆抗体。采用Western blotting进行的组织特异性分析表明,Ran蛋白在卵巢、精巢和肾中表达,在心、脑、肝、脾和肌肉中不表达。本工作为采用免疫耗竭法、免疫共沉淀、体外系统模拟等方法进一步研究鱼类．Ran基因的生理功能及分离鉴定其结合蛋白提供了良好基础。     

彭泽鲫两个雌核发育克隆的 RAPD分析

采用随机扩增多态DNA技术,对彭泽鲫种群内两个不同雌核发育克隆进行比较分析.在使用的30个随机引物中有28个引物的扩增效果良好,两个克隆各5个样本共产生清晰可辨的扩增带2154条(其中克隆H为1088条,克隆L为1066条).克隆H群体内的平均遗传距离为0.018070±0.015489,克隆L群体内的平均遗传距离为0.017827±0.015203,两个克隆群体间的平均遗传距离为0.352511±0.009692,群体内和群体间的遗传距离清晰地表明了同一雌核发育克隆群体的遗传相似性和不同克隆群体间的遗传异质性.由NJ聚类法构建的分支树状图也很好地反映了两个雌核发育克隆群体及个体间的相互关系.在28个引物对两个克隆的扩增带中,一共可找到91条多态性片段,一些引物如Opj15、Opp8、Opq11和Opq14等,产生了非常丰富、稳定的多态性标记,可以作为两个雌核发育克隆的有效鉴别指标.彭泽鲫两个雌核发育克隆在分子水平上的差异进一步证实了彭泽鲫种群的遗传多样性,与银鲫相类似,彭泽鲫种群的遗传多样性对单性脊椎动物的进化理论研究和彭泽鲫的选种育种实践都具有重要的意义.     

多倍体银鲫F系bmp15不同等位基因的分子特征、基因组结构和表达模式

为探究骨形态发生蛋白15(Bone morphogenetic protein 15, bmp15)在银鲫(Carassius gibelio Bloch) F系卵巢发育过程中的表达特征,研究采用cDNA末端快速扩增(RACE)方法首先从银鲫F系卵巢cDNA中克隆了2个bmp15部分同源基因(Homeologs),将其命名为Cgbmp15a和Cgbmp15b,它们各自具有3个不同等位基因。不同脊椎动物Bmp15蛋白序列多重比对和系统进化树均表明,银鲫为异源六倍体,在其进化历程中发生了两轮多倍化,其中早期的异源多倍化整合了来自2个原始祖先的染色体组,导致银鲫和鲫的四倍体共同原始祖先基因组中包含bmp15a和bmp15b;随后第二轮同源多倍化最终导致银鲫存在6个bmp15等位基因。bmp15基因及其邻近基因同线性分析表明,银鲫在形成异源多倍体后,其基因组发生了复杂的变化,包括bmp15邻近基因的丢失。Cgbmp15a和Cgbmp15b均主要在卵巢中表达,在皮质泡期卵母细胞中表达量最高;无论是在银鲫成体组织还是不同发育阶段的卵子中, Cgbmp15a的表达水平显著高于Cgbmp15b的表达水...     

矩形车轮虫的再描述

目的：我们对泸州市鲇类寄生车轮虫进行调查,对于已经发现,但由于原来的技术水限制需要重新描述的,或缺少资料的车轮虫,给予重新描述或补充新的资料。方法：用国际间统一的千银法染色以显示车轮虫的附着盘结构和口围绕度,用Lom（1958）倡导的”统一的特定方法”（Uniform specific characteristic system）进行测量,用Van＆Bassion（1989）提供的方法描述车轮虫的齿体。结果：对寄生在泸州地区养殖鱼类斑点叉尾鲴（Ietalums punetaus）的鳃上的车轮虫进行了描述,该车轮虫是矩形车轮虫（ Trichodina rectangli）。结论：矩形车轮虫是陈启鎏和谢杏人1964年在青鱼、草鱼等鱼身体上发现的,但是没有显微照片。国际上有许多它的同种异名的车轮虫的描述,这些文献也只有附着盘的显微照片。斑点叉尾鲡是矩形车轮虫的新寄主记录。本研究用国际统一的方法对矩形车轮虫进行描述,并绘出了矩形车轮虫的齿体定位图,提供了完整的统计数据,以及完整的显微照片,即附着盘、口围绕度和细胞核显微照片。     

鲢、鲤和鲫肝细胞原代培养

微囊藻毒素(Microcystins)是一类淡水水体中危害很严重的生物毒素(Biotoxin),由微囊藻毒素所引发的环境问题及其对人类健康的危害正日益受到科学家的关注1.已知微囊藻毒素作用的靶器官为肝脏,以往的研究多集中在微囊藻毒素对动物肝脏组织的损伤,如口服或腹腔注射毒素,引起肝组织结构破坏、肝出血甚至肝坏死,但用整体实验动物或器官研究微囊藻毒素毒理学较难深入,因此建立毒理学实验模型十分重要.肝脏作为动物体内最重要的解毒器官,是研究微囊藻毒素毒理学的主要对象.一般毒理学实验都采用肝脏原代培养细胞,因为原代培养细胞生理生化及遗传特性稳定,适于研究外界毒物的毒性、毒理及肝细胞对毒物的应答和解毒机理.本实验通过对鲢(Hypophthalmichthy molitrix Carier et Valencienines)、鲤(Cyprinus carpio Linnaeus)和鲫(Carassius auratus Linnaeus)肝脏原代细胞培养,以建立稳定的毒理学实验模型,为微囊藻毒素毒理学研究奠定基础.