银鲫两个雌核发育克隆间两性生殖子代的遗传多样性分析

本研究在揭示银鲫两性生殖方式的基础上,对以一尾人工雌核发育克隆F的卵子与一尾天然雌核发育克隆D的精子授精所获得的18尾FD后代及其亲本进行RAPD分析.扩增结果表明,在18尾FD子代中可检测到丰富的DNA多态片段,这些多态片段来自于银鲫两性生殖的重组.FD子代的扩增图谱不仅与母本的扩增图谱不同,而且个体间的扩增图谱也存在着较大的差异.这些差异的DNA片段根据其来源可基本分为四类.与异精刺激雌核发育的子代的情况不同,两性生殖FD子代间平均遗传距离高达0.23±O.123,远远高于异精刺激雌核发育的子代间的平均遗传距离(约＜0.01).在FD的三类表型中,SD个体间的平均遗传距离最大,为0.235±0.097;其次是SF间的平均遗传距离,为0.148±0.073;而NL间的平均遗传距离最小,为0.094±0.083.银鲫的遗传多样性和两性生殖方式为银鲫种群提供了丰富的遗传变异,创造了更多的遗传多样性.在分析了2320条(平均每个个体116条)可分辨的扩增带的基础上,采用NJTREE构建了呈现FD个体间及其与亲本相似性的分支图.NL3与母本的相似度最高,SD3与父本的相似度最高.在FD三种类型中,SD与NL和SF的平均遗传距离较大(＞0.31),而NL和SF的平均遗传距离仅为0.124.母本与父本的遗传距离约为0.35,与以前的研究结果类似,而FD 18尾个体与父母本的平均遗传距离均约为O.32,基本一致.但将18尾个体按体型分别统计平均遗传距离,不同的体型与父母本的相似性存在着较大差别.母本与SF的相似率最高,约为71%;父本与SD的相似率最高,约为70%.这可能由于扩增出一些与表型相关的DNA片段,从而导致了FD三种类型与亲本的相似性与表型相关.银鲫具有两种生殖方式的揭示将为解决长期困惑进化遗传学家的难题寻找到一个新的突破口,也进一步确立了银鲫在单性脊椎动物和多倍体脊椎动物进化遗传学研究中的特殊意义.     

电脉冲作用将外源基因导入稀有(鱼句)鲫精子的研究

将稀有鲫 (Gobiocyprisrarus)精子与重组质粒pCAhLFc线性DNA混合温育 ,经电脉冲处理后与卵子受精 ,孵化出苗。从鱼苗中提取DNA ,经PCR检测 ,2 5 .5 %～ 6 6 .7%鱼苗带有外源基因。在显微镜下观察经电脉冲处理过的精子 ,发现其活力有不同程度下降 ,受精率也有不同程度下降 ,说明不同的电脉冲条件对精子有不同程度的损害作用。精子与外源DNA混合温育 ,经电脉冲处理后 ,用DNA外切酶消化后 ,提取精子DNA ,经PCR检测 ,仍有阳性电泳带 ,证明电脉冲可以促使稀有鲫精子摄入外源基因     

饥饿对银鲫血液组分和卵巢发育的影响

对银鲫 (Carassiusauratusgibelio)进行投喂、饥饿 (1～ 4周 )、饥饿投喂 (饥饿 2周再投喂 2周 )处理后 ,测定其血液组分和卵巢发育的指标。结果表明 :饥饿处理后银鲫血液中血糖、甘油三酯的含量显著降低 ;红细胞数量、血红蛋白含量和胆固醇含量先显著降低 ,随后回升到投喂组水平 ;在饥饿过程中白细胞的数量、红细胞的长短径、红细胞沉降率和总蛋白均无明显变化。饥饿投喂处理的银鲫血液中红细胞数量、甘油三酯和胆固醇含量与投喂组无差异 ,但血糖含量仍显著低于投喂组 ,而白细胞数和血红蛋白含量显著高于投喂组。饥饿 4周延缓了银鲫卵巢发育 ,其性腺成熟系数和卵径均显著低于投喂组 ;饥饿投喂组的性腺成熟系数和卵径仍显著低于投喂组。分析说明饥饿阻碍了银鲫的卵巢发育 ,而饥饿对银鲫血液组分的影响在再投喂后得到恢复。     

三倍体和二倍体银鲫的精子发生

应用透射电子显微镜观察了行雌核发育生殖的三倍体(体细胞具有150±染色体)和二倍体 (2n=100)银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)的精子发生过程.两种倍性的雄性的精子发生过程中,染色体数和细胞核的体积均呈3∶2的关系;而精巢的结构、细胞的形态和细胞器的构成均无明显的区别.其精子发生经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞几个阶段,精子细胞再经过精子形成过程成为精子;三倍体银鲫的精子发生与二倍体一样能正常完成减数分裂,形成形态和功能正常的雄性配子.正常的精子发生过程证明,体细胞具有150±条染色体的黑龙江银鲫是已经初步完成二倍化的三倍体,雄性个体在生殖群体中起着重要的作用;推测黑龙江银鲫的二倍体实际可能是四倍体,则三倍体的黑龙江银鲫为偶倍性的六倍体,因此其减数分裂可以正常进行,同时又经历了一定程度的二倍化,所以雄性可育,且参与繁殖后代 [动物学报 54(3):467-474,2008].     

雌核发育银鲫和两性融合发育红鲤卵母细胞成熟的细胞学比较研究

对雌核发育银鲫和两性融合发育红鲤的卵母细胞成熟过程,进行了详细的细胞学比较研究。在银鲫卵母细胞成熟过程中,绝大部分卵母细胞的核物质,在胚泡破裂(GVBD)后的第一次成熟分裂时期,出现明显的不同于红鲤卵母细胞核的行为,其染色体逐渐清晰地分为三群,这三群染色体的发育既彼此独立又相互联系,最终形成一首尾相接的三极纺锤体。随后,三极纺锤体扭转、重叠、合并成为一个正常的中期纺锤体。但极少数银鲫卵母细胞也出现了类似于红鲤卵母细胞的成熟单星光,并进而发育成两极纺锤体,形态类似红鲤第一次成熟分裂中期纺锤体。在银鲫上述两类卵母细胞的成熟过程中均未观察到“第一极体”外排的现象。由此,我们确认,银鲫卵是通过第一次成熟分裂异常,卵核染色体不减数来维持染色体倍性的;并且,根据上述特殊现象,我们对银鲫卵子第一次成熟分裂异常的机制进行了初步分析。       

红鲫实验动物含肉率及营养成分分析

目的探讨红鲫实验动物的营养需要、科学配制红鲫饲料。方法用常规方法测定红鲫幼鱼、红鲫成鱼的含肉率及肌肉营养成分。结果红鲫幼鱼、红鲫成鱼的含肉率为46．34％、42．35％;红鲫幼鱼、红鲫成鱼肌肉（鲜样）中分别含水分79．11％、78．49％,粗蛋白质12．47％、14．72％,粗脂肪6．95％、4．37％,粗灰分1．01％、1．41％,无氮浸出物0．47％、1．07％,能量5．65kJ／g、5．24kJ／g,其E／P值（能量蛋白比）为45．32kJ／g、35．69kJ／g。结论红鲫幼鱼、红鲫成鱼含肉率、肌肉营养成分有一定差异。     

白鲫×红鲫杂交后代的遗传变异

以雌性日本白鲫和雄性红鲫为亲本进行杂交,获得了杂交子代合方鲫.对该杂交子代及其亲本的形态特征、繁殖特性和遗传特性进行了较系统的研究.合方鲫的体色为青灰色,外形特征介于父母本之间,表现出杂交特征.合方鲫性腺发育正常,雌雄两性可育,并且具有较高的受精率(90.2%)和孵化率(80.5%),为新品系的繁衍和群体扩大奠定了基础.合方鲫的染色体数为2n=100,DNA含量与亲本一致,是一种二倍体鱼.合方鲫的45S r DNA的ITS区包括ITS-1,5.8S和ITS-2三部分,总长度为884 bp,与亲本序列相似度较高并表现出偏向于父本遗传的特征.同时,杂交子代序列兼有双亲特异碱基位点,表现出重组现象.合方鲫5S r DNA的NTS区具有3种长度类型,序列全长为654 bp,与母本相似度为94.2%,与父本似度为95.1%,杂交子代序列具有明显的重组和突变特征,这些基因重组和突变是品种改良和新品系形成的遗传基础.本研究证明了合方鲫在遗传组成和外形方面都与其亲本有本质区别,是一种有杂种特性的后代,该杂交品种的形成在鱼类遗传育种方面具有重要意义.     

丰产鲫细菌性败血病的研究Ⅰ——病原分离与鉴定

从患败血病的丰产鲫 (Carassiusauratusofpenze (♀ )×Cyprinusacutidorsalis (♂ ) )脾脏中分离到的一株细菌CSS 4 2 ,经人工感染证实为病原菌。其主要特征为短杆状 ,革兰氏阴性 ,有运动性 ,极端生单鞭毛 ,不产生芽孢 ,无荚膜 ;对 0 1 2 9弧菌抑制剂不敏感 ,能利用葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、肌醇等 ,不利用丙二酸盐、乳糖、木糖、棉子糖、山梨糖、福寿草醇等 ;氧化酶、精氨酸双水解酶阳性 ,尿素、苯丙氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阴性。经细菌自动化鉴定系统VITEK AMS 60鉴定 ,CSS 4 2菌株为豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae)。药物敏感试验表明 ,CSS 4 2对链霉素、妥布霉素、氯霉素、利福平、诺氟沙星、呋喃妥因等药物敏感 ,对青霉素G等不敏感     

稀有鮈鲫HAN近交系的免疫与生化标记分析

目的 筛选稀有鮈鲫HAN近交系遗传质量检测标记.方法 采用鳞片活体移植和同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳法对稀有鮈鲫HAN近交系的遗传纯度进行检测.结果 在免疫标记分析中,鳞片同体移植存活率为96.7％以上,野生群体移植存活率为7.4％,而HAN系F22鳞片异体移植的成功率为80％,显著高于野生群体.在生化标记分析中,在HAN系F22中无多态性位点,不同个体的同工酶谱呈现高度一致,在野生群体中有2个多态位点即est2和est3,多态位点的比例为15.56％.结论 经过多代近亲交配,稀有鮈鲫HAN近交系生化标记基因已经纯合,鳞片异体移植存活率达到80％,表明HAN系具有较高的遗传均一性.选用鳞片的异体移植及酯酶和肌蛋白分别作为免疫和生化标记对稀有鮈鲫HAN近交系进行遗传质量检测是可行的.